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裸鼠皮下成瘤实验

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2024/10/08

基因测序仪

裸鼠皮下成瘤实验

细胞准备：

1. 按照正常传代过程，收集、离心、吹散，并最终用DPBS制成细胞悬液，

2. 细胞计数板计数细胞悬液的细胞浓度

3. 含matrigel胶的细胞悬液制备原则：a.每只裸鼠大腿内侧皮下注射300ul的含matrigel胶的细胞悬液； b.细胞悬液与matrigel体积比为1:1，即全部需要的细胞数量均包含于细胞悬液中，然后与等体积的matrigel胶均匀混合。

4. 根据含matrigel胶的细胞悬液制备原则及实际需要皮下注射的裸鼠数量和细胞数量，制备相应的含matrigel胶的细胞悬液

5. 以注射1只裸鼠为例，一般每只裸鼠的两侧大腿均可注射，每只小鼠每侧注射1x10⁵细胞为例：根据细胞计数板计数的细胞浓度，适当稀释或者浓缩细胞悬液，配制细胞浓度为1x10⁶cells/ml的细胞悬液，取上述细胞悬液250ul，并再加入125ulDPBS，使用预冷的枪头的EP管，将该375ul细胞悬液与375ul matrigel胶在冰上均匀混合，得到共750ul的含matrigel胶的细胞悬液，每侧注射300ul，即1x10⁵cells。

6. 冰上保存制好的细胞悬液，尽快进行裸鼠皮下种植

裸鼠大腿内侧皮下种植实验操作：

1. 实验操作台及相关实验物品的准备，实验器械的消毒酒精棉球擦拭消毒

2. 使用1ml注射器吸取含matrigel胶的细胞悬液，排尽注射器内空气

3. 用右手抓取裸鼠，抓牢颈后部和背部皮肤，并确定大腿不会影响进针后，左手持针在大腿内侧窝处进针，进针的强度为感觉到刚好刺破皮肤，此时稍微退出一点针，缓慢注射，注射完毕后停顿5s，轻轻拔出注射器。切忌造成裸鼠出血和注射液体外流。

4. 将小鼠放回饲养笼内，检查饲料及饮水，在鼠笼标签做好完整的相关实验标记，将鼠笼放回原处

5. 次日观察裸鼠生存状况，一般裸鼠会在2-4周成瘤。

成瘤后，将裸鼠采用颈部处死法，剖开腹部，用镊子小心将瘤子剥下来，并拍照。

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