【讨论】灵芝HPLC指纹图谱方法建立实验设计方案讨论

三、HPLC实验：

流动相的选择：
试验过程中对比不同的流动相: 甲醇- 水、甲醇- 乙腈- 水、乙腈- 水；如果效果不好再考虑乙腈-0. 5 %醋酸铵溶液、甲醇-0. 5 % 醋酸铵溶液流动相体系。

实验方案1：等度洗脱
色谱条件待定。
流动相暂定为20%甲醇+80%水。检测波长视紫外图谱情况而定。
记录色谱2h。
实验方案2：梯度淋洗 （暂定）。

时间/MIN 流速/ML/MIN 甲醇/% 水/%
0 1.0 20 80
15 1.0 40 60
25 1.0 70 30
35 1.0 85 15
60 1.0 100 0
120 1.0 100 0
由于不知灵芝成分的极性如何，因此以梯度淋洗为主要考虑方法。

稳定性试验：

供测试溶液放置3h、6h、12h、24h、48h、72h后再进样, 记录指纹图谱。计算各共有色谱峰的相对保留时间的RSD (%)、 相对峰面积的RSD。

（或者依次扫全息紫外图谱？）

（10批次样品处理中间会有时间间隔，很难同时处理这么多批次，如果放置后发生变化，需要处理一批做一批，若不会有明显变化则可以全部药品处理完后统一做其HPLC实验）。

精密度试验（重现性试验）：

供测试溶液连续进样5 次, 记录指纹图谱。计算各共有色谱峰的相对保留时间的RSD (%)、 相对峰面积的RSD。