【讨论】保留时间大大缩短~从55min到35min，现在是12min。怎么回事 啊？

可能是气温的关系吧。气温升高柱温还有滤头都有影响。

流动相有没有变化？温度（柱温和室温）有没有变化？柱子使用了多长时间柱效是否下降？
压力波动考虑气泡和泵的问题(比如密封)。

同意DU老师的分析……

可能是单向阀阻了，特别是走水相的阀，走过缓冲盐流动相了，没清洗干净，造成单向阀阻塞，压力波动特别大，且水的比例不大，有机相浓度大了，保留时间提前。做缓冲溶液流动相后，一定要清洗泵头，还有有甲醇：水10：90冲洗半个小时以上，甚至一个小时，才能洗干净。

是不是柱子没有平衡好啊？你的测试条件发上来大家共同研究一下啊

流动相出现大幅度变化吗，还是色谱柱效能急剧下降？

黄酮检测，波长370nm
流动相是0.4%磷酸溶液和甲醇，48：52。一直也都是这个比例。

每次用完后用纯水和甲醇冲洗131min 流速：1
时间 水 甲醇
1-40min： 90 10
41-50 48 52
51-80 48 52
81-90 0 100
91-130 0 100
131 0 0

使用前，用100甲醇冲洗30min，再90水冲洗30min，接着换流动相平衡30min。基线都很平稳。

希望不是柱子的问题，我还指望这跟柱子毕业呢。迪马的。呵呵，谢谢各位了。

压力小了可能是系统漏液了或者是柱子填料流失了也，还有一种最不可能也是你最不愿看到的就是你以前做的都不正常，现在才正常，呵呵，开玩笑的

仪器的问题