ylyra1984
第1楼2008/05/19
步骤7. 色谱柱的老化色谱柱安装和系统检漏工作完成后,就可以对色谱柱进行老化了。
对色谱柱升至一恒定温度,通常为其温度上限。特殊情况下,可加热至高于最高使用温度10-20℃左右,但是一定不能超过色谱柱的温度上限,那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后,记录并观察基线。初始阶段基线应持续上升,在到达老化温度后5-10分钟开始下降,并且会持续30-90分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在2-3小时后基线仍无法稳定或在15-20分钟后仍无明显的下降趋势,那么有可能系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况,应立即将柱温降到40℃以下,尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化,不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。
一般来说,涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长,而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而PLOT色谱柱的老化方法有各不相同。PLOT柱的老化步骤:HLZ Pora 系列 250℃, 8小时以上Molesieve(分子筛) 300℃ 12小时Alumina(氧化铝) 200℃ 8小时以上由于水在氧化铝和分子筛PLOT柱中的不可逆吸附,使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移。
当柱子分离过含有高水分样品后,需要将色谱柱重新老化,以除去固定相中吸附的水分。
步骤8. 设置确认载气流速对于毛细管色谱柱,载气的种类首选高纯度氮气或氢气。载气的纯度最好大于99.995%,而其中的含氧量越少越好。如果您使用的是毛细管色谱柱,那么依照载气的平均线速度(cm/sec),而不是利用载气流量(ml/min)来对载气做出评价。因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度。推荐平均线速度值:氮气:10-12cm/sec 氢气:20-25cm/sec载气杂质过滤器在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命,而且很大程度的降低了背景噪音。建议最好安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器。使用ECD系统时,最好能在其辅助气路中也安装一个脱氧管。
步骤9. 柱流失检测在色谱柱老化过程结束后,利用程序升温作一次空白试验(不进样)。一般是以10℃/min从50℃升至最高使用温度,达到最高使用温度后保持10min。这样我们就会的到一张流失图。这些数值可能对今后作对比试验和实验问题的解决有帮助。在空白试验的色谱图中,不应该有色谱峰出现。如果出现了色谱峰,通常可能是从进样口带来的污染物。如果在正常的使用状态下,色谱柱的性能开始下降,基线的信号值会增高。另外,如果在很低的温度下,基线信号值明显的大于初始值,那么有可能是色谱柱和 GC系统有污染。其他:色谱柱的保存用进样垫将色谱柱的两端封住,并放回原包装。在安装时要将色谱柱的两端截去一部分,保证没有进样垫的碎屑残留于柱中。
注意:当空气中氢气的含量在4-10%时,就有爆炸的危险。所以一定要保证实验室有良好的通风系统。
如何选择合适的毛细柱?
固定相的选择:
根据相似相溶原理,选用非极性的固定相分析非极性化合物。
如果化合物可以用不同的固定相分析,首选最小极性的固定相。
非极性的固定相使用寿命大于极性固定相。
应用范围最广的五种固定相:TP-101、TP-5、TP-1701、TP-WAX、TP-FFAP能满足90%以上的分析应用。
柱内径的选择:
0.2mm:适用GC/MS以及需要非常高效的场合。
0.25mm:最常用的内径规格,分流/不分流进样应用,较高柱效,用于复杂多组分样品分析。
0.32mm:柱效低于0.25mm常规柱,柱容量较常规柱高。
0.53mm:替代填充柱,柱容量高,痕量分析。
液膜厚度的选择:
根据不同内径的标准膜厚选择
根据不同内径的标准膜厚选择
0.2mmID~0.1祄
0.25mmID~0.25祄
0.32mmID~0.25祄
0.53mmID~0.5祄
标准膜厚能获得最广泛的应用
薄液膜用于高沸点化合物:石油、甘油三脂等
厚液膜用于挥发性化合物:气体、低沸点溶剂等
柱长度的选择:
10/15M:通常十个组分以下简单样品快速分析。
25/30M:标准柱长,满足绝大多数应用。
50/60M:复杂化合物的分析。
进样应注意问题
手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡(吸样时要慢、快速排出再慢吸,反复几次,10ul注射器 金属针头部分体积0.6ul,有气泡也看不到,多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡,(指10ul注射器,带芯子注射器平感觉)进样速度要快(但不易特快),每次进样保持相同速度,针尖到汽化室中部开始注射样品。
关机时要等色谱降下温来才能断掉载气(N2)。
遵循一般的安全使用条件即可,FID并没有特殊的要求。
FID检测器没有完全冷却即断掉载气也没有大的问题。
但要注意:断气前,需要确认加热电源是否已经切断不再加热;
FID火焰熄灭后,不宜再供应氢气(安全考虑);
在分析测试开始,FID还没有达到设定温度时,不要进样(有可能存在高沸点物质造成污染)。
而ECD和TCD则需要特别保护:
ECD:不能断气。无论是通电还是不通电,工作还是不工作,要维持5-10ml/min的载气流量。
TCD:温度没有降下来前,不能断载气。同样:未有通载气之前,不能对TCD上电。