【资料】熊猫分享－－高效液相色谱仪验证－ Water 2695 仪器验证报告

中心化验室 型
高效液相色谱仪验证方案
（SOP-YZ-???）










方案制定人： 制定日期：
方案审查人： 审查日期：
方案审核人： 审核日期：
方案批准人： 批准日期：









药 业 有 限 公 司

目 录



1、概述
2、验证目的
3、验证实施小组成员及有关责任
4、验证文件
5、合格标准
6、验证方法和步骤
7、验证结果分析和综合评价
8、最终评价
9、验证周期
10、验证记录

1、概述
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。其中LC-2010和Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液相色谱仪。
2、验证目的
检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。
3、验证实施小组成员及有关责任
验证实施小组组长???负责协调及异常情况的处理；操作员??????负责验证的具体操作工作；QA???负责监督实施本方案。
4、主要验证文件
高效液相色谱法（SOP-ZL-???）、
中华人民共和国国家计量检定规程 液相色谱仪（JJG705-2002）、
UV-VIS检测器SPD-20A/SPD-20AV说明书、
溶液传输单元LC-20AB说明书、
中华人民共和国药典2005年版二部、
LC-2010A/2010C操作说明书 安装手册和维修手册。
5、合格标准       

6、验证方法和步骤
6.1验证方法
整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
6.2验证步骤
6.2.1输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定
将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。按式(1)、式(2)计算 SS和 SR。




表1
流量设定值（mL/min）    0.5    1.0    2.0
测量次数    3    3    3
流动相收集时间（min）    10    5    5
SS＝(Fm－FS)/FS×100%……(1)
SR＝(Fmax－Fmin)/F×100%……(2)
式中：SS——流量设定值误差(％)；
SR——流量稳定性误差(％)；
Fm＝(W2－W1)/ ρT•t，流量实测值(mL/min)；
W2——容量瓶＋流动相的重量(g)；
W1——容量瓶的重量(g)；
FS——流量设定值(mL/min)；
ρT——实验温度下流动相的密度(g/cm3)；
t——收集流动相的时间(min)；
Fmax——同一组测量中流量最大值(mL/min)；
Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min)；
F——同一组测量值的算术平均值(mL/min)。
输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录见附录一
6.2.2柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定
将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。

柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录见附录二。
6.2.3自动进样器进样量准确度误差的检定
取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50μl。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度。
自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录见附录三。
6.2.4检测器的检定
6.2.4.1检测器基线噪声和基线漂移的测定
取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min内基线上读出噪音值；从60min基线上读出基线漂移值。
6.2.4.2检测器最小检测浓度的测定
取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm,开机预热，待仪器稳定后取1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液进样20μl，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高计算最小检测浓度CL。公式如下：
CL=(2×Nd×C)/H
式中CL——最小检测浓度，g/ml；
Nd——基线噪声峰峰高，mm；
C——标准溶液浓度，g/ml；
H——标准溶液峰峰高，mm。
检测器的检定原始记录见附录四。
6.2.5整机性能的检定
取C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0ml/min，检测器波长设定为254nm（当选用萘时）或272nm（当选用咖啡因时）,柱温设定为40℃。开机预热待仪器稳定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液进样10μl，连续进样6次，记录其峰面积和保留时间，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。
整机性能的检定原始记录见附录五。
7、验证结果分析和综合评价

8、最终批准


批准人： 批准日期： 年 月 日
9、验证周期

10、验证记录
（1）输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录
（2）柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录
（3）自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录
（4）检测器的检定原始记录
（5）整机性能的检定原始记录

附录二
柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS 和控温稳定性TC 的检定原始记录


此项检定结论：


检定人： 复核人： 检定日期：
附录三
自动进样器进样量准确度误差的检定原始记录

液相色谱仪型号： 自动进样器型号： ；
进样前进样瓶加水的总重：W1= g；
进样后进样瓶加水的总重：W2= g；
检定温度： ℃，水的密度ρ g/ml；
进样量准确度误差=[(W1- W2)-(50×10×10-3×ρ)]/（50×10×10-3×ρ）×100%









此项检定结论：








检定人： 复核人： 检定日期：

附录四
检测器的检定原始记录

液相色谱仪型号： 检测器型号：
流动相： 流速： 色谱柱：
萘甲醇标准溶液浓度C： 配制人： 配制日期：
基线噪声:Nd=
基线漂移:H=
最小检测浓度的计算CL=(2×Nd×C)/H



此项检定结论：







检定人： 复核人： 检定日期：

附录五
整机性能的检定原始记录




此项检定结论：




检定人： 复核人： 检定日期：

一般液相应该也适用的吧。

这是自己单位做吗？和计量所也差不多了嘛：）

如果再加上工作站的验证，那就赶上国际水平啦