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DNA的快速电泳

生命科学仪器综合讨论

  • SuperBuffer(100X)简介

    主要用途    DNA的快速电泳,取代传统的TAE和TBE。

    产品介绍    SuperBuffer是一种革命性的超快高分辨核酸电泳液,由于其产热低,故可以以高达20-25V/cm的电压电泳,并且分辨率比传统电泳液更高。该产品能彻底替代TAE、TBE等传统DNA电泳液。

    主要特点    1:快速
    工作电压可高达20-25v/cm,比TAE和TBE的5-8V/cm(见分子克隆手册)高2-4倍,电泳时间只有使用TAE或TBE时的1/4。分辨率要求不高的定性检测(如PCR检测和酶切检测)可以在十分钟内完成。

    2:高分辨
    快速电泳防止了DNA的扩散,用0.5%的胶得到的电泳分辨率与用2-3%的胶(TAE或TBE电泳)得到的相当(效果图见www.tiandz.com网站相关内容)。

    3.不影响后续的杂交,回收和连接等反应。

    4.节约成本,0.5-1%的胶适合于分离大小在100bp-50kb之间的DNA,不需要高浓度胶。本产品能反复使用数次。

    5.销售价格与市售国产TBE更便宜,产品有粉剂、预配液两种规格供客户选择。

    物理特性    无色液体,4度或常温保存


    二:    SuperBuffer(100X)的使用
    SuperBuffer(100X)必须在使用前用水稀释100倍,其后的使用方法跟TAE或TBE的使用完全一样。如果使用高电压则有以下建议。

    1.    琼脂糖胶浓度
    分离从100bp到50kb的DNA片段均可使用0.5-1%的胶并能得到较高的分辩率。使用SuperBuffer电泳时由于可以高压电泳,胶浓度似乎越低电泳效果越好,也许是因为电泳速度越快,小片段DNA的弥散现象越轻,速度对小片段DNA弥散的影响超过了胶浓度对它的影响,故不必靠高浓度的胶来提高分辨率。使用高浓度的胶反而会使电泳时间加长,得不偿失。

    2.    EB染色
            如果使用20-25V/cm电压,最好不要把EB加入上样液中,否则EB很容易在高压下与DNA分离。建议在倒胶前将EB直接加入琼脂糖中, EB的最佳终浓度为0.4 -0.5μg /ml。原理上SuperBuffer与EB以外的其它核酸染料(如SYBR Green)兼容,但天泽基因暂时没有进行相关实验,有待用户自己实验验证。

    3.    样品的离子强度
                SuperBuffer比TAE和TBE对样品离子强度更敏感。如果待测样品(如酶切产物,PCR产物)的离子强度与DNA分子量对照(如DNA ladder)的离子强度不同,则离子强度低的泳动稍快,估算得到的DNA分子大小可能稍有误差。如果需要准确估计,建议电泳使分子量标准和待测样品的盐浓度一样(在分子量标准中加酶切或PCR缓冲液)。

    4:    电泳液用量与电压的关系
            如果电泳槽的容量在100-200ml左右的(迷你型电泳,电极距离10cm左右),可以使用200-250V电压进行电泳。电压如果超过20V/cm,则电泳时间不宜超过三十分钟 (在此电泳条件下,电泳三十分钟足够将0.1-5kb的DNA分开)。

            如果电泳槽的容量为600ml或更大,22.5V/cm(按正负两极距离)电泳一小时以上一般没有任何问题。

    5:    SuperBuffer的重复使用
            SuperBuffer缓冲液最多可重复使用4-5次左右(如果电泳槽的容量为600ml的话);重复使用前最好将其搅拌混匀并放置片刻,以恢复其缓冲能力。随着重复使用次数增加,相同电压下DNA电泳速度会稍微加快,但分辨率变化不大。

    6:    电流电压降低现象
    若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限,如果有上限设置,需将其调高使之与电泳电压匹配。如果原因不明,请与仪器生产厂家联系。部分电泳仪器做最高使用电压为200V。

    7:    与RNA变性胶, 碱变性胶,脉冲电泳和PAGE的兼容性
    天泽基因没有进行相关兼容性实验。
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  • 第2楼2006/05/23

    就是电泳缓冲液吧,真的有那么好?

    我们用的是TBE啊,如果真的有说的那么好,还真是可以考虑一下哦.

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  • 第3楼2006/05/23

    麻烦楼主说清楚一点,怎么个联系法

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  • 第4楼2006/07/04

    只能用4-5次?TAE可以用10几次。

    我们也不会买配好的TAE,会自己配,更省钱。

    你们不如公布配方,卖原料?

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  • 第7楼2006/07/16

    我们用的是TBE啊,如果真的有说的那么好,还真是可以考虑一下哦.

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  • 第10楼2006/07/26

    "DNA的快速电泳"是干什么用的,能测DNA结构吗?

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  • 第11楼2006/07/28

    比TAE的电压高那么多吗?那胶不是很容易化?

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  • 第12楼2006/08/08

    你也不说价钱??? 电泳缓冲液用TBE就行!

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  • 第13楼2006/09/11

    如果要求不高
    或者是针对大分子DNA的快速电泳
    可以试用一些实验室的低密度多孔纳米材料
    没有毒性——环境安全
    极其快速,少至1~2min,多至7~8min

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  • 第14楼2006/09/29

    配方卖不卖啊,多少钱呀?

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  • 第15楼2006/10/07


    真的有这么好吗??
    那我们倒要试一试啊!

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