【讨论】环氧乙烷灭菌——生物指示剂的应用

环氧乙烷灭菌我还没用过呢，找了两篇文献你看看吧
从文章里看，灭菌片似乎并不是生物指示剂

环氧乙烷灭菌过程控制
环氧乙烷灭菌器的应用与管理

谢谢！
虽然我想问的是环氧乙烷灭菌后的检验问题，不过仍然谢谢你！

环氧乙烷灭菌效果的评价方法

1. ISO13485明确提出灭菌过程应确认；MDD法规也规定灭菌产品必须建立生产质量保证体系。而GHTF的过程验证指南指出：过程验证应执行IQ、OQ、PQ；而相应的灭菌确认和常规控制的标准中也规定了，确认应1）试运行；2）物理性能鉴定；3）微生物性能鉴定；4）产品性能评价。5）常规控制时参数必须进行连续监控。

2. 灭菌确认

灭菌确认包括试运行和性能鉴定(包括物理性能鉴定和微生物性能鉴定)的全过程。

3. 微生物性能鉴定

微生物性能鉴定就是在选定的过程下，按照标准的要求放置规定数量的过程监测器材，进行灭菌，并对过程监测器材中的生物指示剂进行培养，确定培养结果是阴性或者是阳性，从而确定设定的过程参数是否适合。

相关标准

ISO11138-1 医疗保健产品灭菌 生物指示物 第一部分:通则

GB 18281.1-2000 idt ISO11138-1:1994

ISO11138-2 医疗保健产品灭菌 生物指示物 第二部分:环氧乙烷灭菌用生物指示物

GB 18281.2-2000 idt ISO11138-2:1994

ISO11135 医疗器械 环氧乙烷灭菌确认和常规控制

GB18279-2000 idt ISO 11135:1994

其他标准：EN1422,EN550,EN866-1,EN866-2,EN556......

环氧乙烷灭菌用生物指示物（BI）

1. 适用范围

适用于纯环氧乙烷气体灭菌或者是混合气体灭菌，灭菌温度在20~65℃。

2. 试验微生物

必须是枯草杆菌芽孢。常用ATCC9372。

应标明，应精确至0.5分钟；

一般地，在2.5分钟~5.8分钟之间。

4. 试验微生物的额定总数

用于日常检测的应不小于1×1000000。

5. 生物指示剂类型

常用于环氧乙烷灭菌确认和常规控制的生物指示剂类型有二：

1） 芽孢条：微生物直接接种在条状载体上，经烘干而成，优点是微生物菌数精确，适合于计数，保存时间较长，费用相对低。缺点是培养时间较长，培养麻烦。

2） 自含式：一个小的塑料瓶子中放有芽孢条，里面还有装有培养基的安瓿瓶，灭菌后只需轻轻压碎安瓿，即可培养。优点培养时间较短。缺点是价格贵，计数不方便，比较适合于日常监控。

3）其他类型还有：悬浊液、线状等等，可以根据用户要求定做。

生物指示剂的使用者无须确认抵抗性，但应该确认数量。美国药典规定适用的抵抗性范围为D值从2.6分到5.8分，条件为600mg/L EtO，54℃，相对湿度为60%。允许的数量从不少于1*10^4到不大于1*10^9。

6、D值和无菌保证水平

在有效的时间内，一定比例的微生物将死亡。死亡90%（1 log）的微生物的时间，定义为D值。这样，可以做成一条相关直线。注意当直线穿越100，结果是存活数量将少于1个，表述成一定的成活概率。因此10-6的存活概率或灭菌保证水平（SAL）或者12-spore log reduction（SLR）指出了过程的微生物存活的概率为百万分之一。产品预期用途和有可能造成危险的组织接触，这些和无菌液体通道要求或者外科植入应该验证达到10-6的无菌保证水平（SAL）。对于另外一些产品不准备接触危险的组织的医疗器械，典型的，无菌保证水平可以是10-3。应该指出的是，欧洲市场上标有“无菌”字样的产品要求的无菌保证水平是10-6。
为了使用时相对容易，医疗器械生产商通常使用过度杀灭途径。在这样的模式下，含有106菌数的BI在半周期循环时，理论上，只存活一个细菌。当时间倍一倍，整周期时间可以达到12-spore log reduction（SLR）。

呵呵，文章中有检验的内容，跟蛋白质版主说的比较相似

你好，我想请教一下，“允许的数量从不少于1*10^4到不大于1*10^9”是哪个标准规定的呢？

这个属于指导性，实际操作根据厂家提供的范围为准，一般在10^6附近，只要在该范围内都是可以接受的。

无菌试验的型式有两种，以产品作为无菌检验物的，用GB14233,2中的无菌试验方法检测产品无菌状态，这种方法只能证实来样无菌状况, 不能用于证实灭菌批的灭菌效果 ，该试验方法只适宜于国家抽样检查、医院进货检验和第二、第三方抽样检查。中国药典规定这种方法的细菌培养周期为十四天。以生物指示物作为无菌检验物的, 这种型式作为灭菌过程控制结果的监测, 能证实同一灭菌批的灭菌效果.。2000年我国等同采用ISO 11135国际标准，发布了GB 18279-2000 《医疗器械 环氧乙烷灭菌确认和常规控制》强制性国家标准，该标准第6章《过程控和监测》中规定了用EO灭菌指示物试验灭菌结果，2002年国家药品监督管理局发布了《无菌医疗器械生产质量管理实施细则》，多肽合成仪规定了EO灭菌过程确认的要求，强制推行了GB 18279标准，使我国EO灭菌过程控制与国际接轨。

关于EO灭菌生物指示物细菌培养周期；生物指示物是对特定灭菌处理有确定的抗力，装在内层包装中可供使用的染菌载体。用于监测消毒或灭菌效果，对用于监测环氧乙烷灭菌效果的菌片，试验微生物的额定总数必须不小于1*106 cfu。环氧乙烷灭菌以枯草杆菌黑色变种芽孢（ATCC9372）为指示物，灭活指数达到106。
生物指示物分菌片式生物指示物和自含式生物指示物二种。执行国家标准：GB18281.2-2000 《医疗保健产品灭菌 生物指示物 第2部分：环氧乙烷灭菌用生物指示物》，菌片式生物指示物如中国军事医学科学院的产品。细菌培养周期为7天，但使用成本低。自含式生物指示物是兼菌片与培养基为一体的生物指示物，细菌培养周期较短，如3M公司的有48小时72小时的，或更短时间，但使用成本高。生物指示物的细菌培养周期不是由使用企业或政府监督部门确定的。而是由包装内生物指示物的性能所决定的。按GB 18281.2-2000规定，生物指示物细菌培养周期由制造商标注在说明书中。所以，使用生物指示物的企业或部门，细菌培养周期的依据是生物指示物产品使用说明。