仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

【求助】荧光检测器的液相,急

液相色谱(LC)

  • 各位大侠:
      我做荧光素钠的检测,流动相条件为0.05MOL/L的磷酸二氢钾(PH7.4):甲醇=55:45,激发波长490,发射波长515.我配了一个0.5微克/ML的标准品,进针10微升后纵轴EU达10000多,峰形还不错,我接着进样品,但同一样品的同一针都差别很大,差几十倍,最后我把进样量变为1微升我进了15个样,有两个样两针是几乎一致的,其他的都有差别,有的甚至在我要的峰后还出来一个峰(有两个样是这个情况),我实在很不理解,不知道是哪里出了问题,下一步应该怎么办,怎么分析.大家做过的帮帮我,指点一下,急.
    附件里是我的谱图,(样品数从1-8应该是浓度增大的,(因为是不同时间点的累积量,)肉眼明显看出样品7,8颜色深,但检测出来的峰却很小,)大家帮分析一下.
    荧光素钠谱图
    荧光素钠谱图
    +关注 私聊
  • Easy-Boy

    第1楼2008/10/27

    进样量需要保持5ul以上才准确,如果浓度大,可以稀释一下。

0
    +关注 私聊
  • duming

    第2楼2008/10/27

    考虑一下是不是增益设置太大了,重显性不好是不是样品不稳定

0
    +关注 私聊
  • 阿图

    第3楼2008/10/28

    样品有没有充分混匀活着样品本身稳定性太差呢?

0
    +关注 私聊
  • qingqingcao

    第4楼2008/10/30

    我大概明白了。
    原因是你测试时间太短了。因为样品中可能还有其他杂质,你每个样品不要用15分钟。用30钟。看看后面还有其他杂质峰。
    很明显请看5-1ul那个样品。其中前面有几个峰。这几个峰可能前样品强保留的。措施有两种:
    1.延长测试时间。30分钟。
    2.注意清洗进样针。

    ada825 发表:各位大侠:
      我做荧光素钠的检测,流动相条件为0.05MOL/L的磷酸二氢钾(PH7.4):甲醇=55:45,激发波长490,发射波长515.我配了一个0.5微克/ML的标准品,进针10微升后纵轴EU达10000多,峰形还不错,我接着进样品,但同一样品的同一针都差别很大,差几十倍,最后我把进样量变为1微升我进了15个样,有两个样两针是几乎一致的,其他的都有差别,有的甚至在我要的峰后还出来一个峰(有两个样是这个情况),我实在很不理解,不知道是哪里出了问题,下一步应该怎么办,怎么分析.大家做过的帮帮我,指点一下,急.
    附件里是我的谱图,(样品数从1-8应该是浓度增大的,(因为是不同时间点的累积量,)肉眼明显看出样品7,8颜色深,但检测出来的峰却很小,)大家帮分析一下.
    荧光素钠谱图
    荧光素钠谱图

0
    +关注 私聊
  • ada825

    第5楼2008/11/03

    确实是增益设太大了,原来是1,这次调为1000,就好一些,而且进样针的位置调的不对,可能是太高了,吸不满。后来又把针的位置调了一下,每两针的重复性都还不错,但是我是二组样品,理论上应该差不太多,实际结果差的挺多,我每个样进两针,重复性挺好,是不是就是我样品的问题了,机器系统是不是没什么问题了?大家帮忙看一下附件里的谱图(L的是一组,R的是一组,后面标志的数字如60是时间,我在60,90直至240分钟,每30分取样一次,样品里的荧光素钠浓度应该是越来越高的。)进行了两组,每一组的趋势倒还行,但两组差异有些大,每个时间应该是对应的。大家分析下如果机器和条件没问题,就应该是我取样的问题了,那我就再在取样上注意一下,调整一下。
    还有一个问题,就是GBR那组,是把空白的GBR液体,也在5分的时候(跟荧光素钠的保留时间很接近)也出了一个小峰,是GBR本身出的峰,还是我稍微污染了GBR液呢(带入了些荧光素钠?)这个峰挺小的,峰高10左右,我样品中最小峰90左右,是不是可以忽略它,因为我感觉样品的趋势还不错,重复性也挺好。
    谢谢各位了。
    谱图

    duming 发表:考虑一下是不是增益设置太大了,重显性不好是不是样品不稳定

0
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...