【分享】欧盟兽药检测方法（之十七）

8 样品和取样程序
有关要求见ISO文件78/2-1982 6.3.1节，下列注释源于2052/VI/84-EN附录Ⅱ和EEC 93/256。
8.1 样品的性状：样品应符合64/433/EEC指令中测定肉品及奶中药物残留的要求。
8.2 样品量：样品量应满足测定方法及复验所需量的要求。
8.3 样品的保存和包装必须达到在实验室中正确辨识的要求。
8.4 包装的方法，防腐以及传递必须保持样品的完整，并且不对检验结果造成任何偏差。检验沙拉里菌素的样品必须存放在-18℃以下。
用于分析的肉应从冷冻组织中切取薄片。大块样品不应被解冻。

9 测定步骤
9.1 取2g禽肉组称织或均质的鸡蛋于25mL乙腈中均质，将均质样品放于超声水浴中5min，然后以3000rpm离心5min。
9.1 将上层液转移至250mL分液漏斗中。
9.2 剩余液用25mL乙腈再提取一次，并将上清液合并于分液漏斗中。
9.3 于分液漏斗中加入50mL四氯化碳和20mL饱和氯化钠溶液，振摇1min。
9.4 将下层有机相通过无水硫酸钠并用滤纸过滤至250mL圆底烧瓶中。
9.5 将滤液于旋转蒸发器上蒸发至干。
9.6 将残渣用3×2mL正己烷定量转移至硅胶萃取柱中。
9.7 拉沙里菌素残留用10mL甲醇-三氯甲烷溶液洗脱。
9.8 洗脱液转移至25mL梨形烧瓶中，并用旋转蒸发器蒸发至干。
9.9 残渣用0.5mLHPLC流动相溶解后，于旋涡器上震荡15秒，并超声溶解3min。
9.10 将样液转移至1mL一次性注射器中，并通过Millipore 0.45um滤盘过滤至HPLC进样管中。
9.11 标准曲线
标准添加0-100μg/kg于9.7步骤中进行，每个点重复三次。
9.12 进样量25μL。

10 结果计算
在标准浓度范围内建立峰高与浓度校正曲线，每个样品的拉沙里菌素残留量通过峰高计算，并根据进样量和平均回收率（由添加样品）计算出测定结果（mg/kg）。标准进样25μL等同于提取样100mg。

拉沙里菌素检出量
回收率 % = ———————————— × 100
拉沙里菌素添加量


拉沙里菌素μg（根据标准曲线得到） 1 100
样品中拉沙里菌素含量（mg/kg）= —————————————————— × —— × ————
1000 0.05 回收率%

当样品中拉沙里菌素的浓度高于标准曲线的范围时，提取液应稀释后进样，相应的体积系数应计算在内。
10.2 灵敏度
采用此分析方法测定拉沙里菌素检测低限为10μg/kg。
10.3 质量保证程序
10.3.1 有效性：在10-100μg/kg水平上做了8个加标样品，提取操作应在3天内完成，每一批应包括空白和加标样品。100μg/kg添加样品的回收率为65-90%，批内和批间的精度度CV值小于15%。

11 特殊事例
如果样品中有阳性可疑的，可通过对比可疑峰的发射谱分析可进一步确证。

12 方法注意点

13 质量控制
每天一批能分析16-20个样品，一批中包括9-13个未知样及控制质量的加标样品。
空白样品为原来分析过的不含拉沙里菌素的样品。

14 检测报告

15 缩写语
见手册中标12节附录I中缩写。

16.检验流程图
组织 →加入乙腈 →均质 →过滤 →溶剂提取 → Sep-Pak硅胶柱 →过滤 →HPTLC
→结果计算