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【求助】请教:疏水层析和反相层析相比对蛋白质吸附能力较弱

液相色谱(LC)

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  • 请教:疏水层析和反相层析相比对蛋白质吸附能力较弱??

    原文大意如下——
    疏水等系和反相层析的原理都是利用疏水作用分离蛋白质、多肽的
    但是二者使用的介质和流动相有一定的差别
    其中疏水层析介质的极性>反相层析介质的极性
    所以疏水层析的介质对于蛋白质的吸附能力较弱
    可以使用温和的盐水就可以洗脱
    但是反相层级的介质极性较弱
    需要更强的有机溶剂洗脱之

    【问题是——蛋白质应该是水溶性的啊?
    应该是和极性更强的疏水层析介质接近
    继而疏水层析介质对蛋白质的吸附能力更强
    ?????????????????????】

Surly 2008/12/10

疏水层析,是根据不同的蛋白与疏水表面产生的相互作用的差异,进行蛋白分离的一种方法。一般而言,离子强度(盐浓度)越高,物质所形成的疏水键越强。影响疏水作用的因素包括:盐浓度,温度,pH,表面活化剂和有机溶剂。疏水层析的应用与离子交换层析的应用刚好互补,因此,可以用于分离离子交换层析很难或不能分离的物质。 在吸附层析中,高极性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用极性强的溶剂,如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,最先洗下来,得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反,故称为反相层析。 我觉得这里的蛋白质是指的疏水性蛋白质,蛋白质根据R基团的性质分为疏水性和亲水性,我觉得这两种层析方法应该是用来研究疏水性蛋白质的。 我不是搞生物的,只是发表一点自己的意见,有错误的话请谅解。

It is me! 2008/12/10

1楼的说得非常对!!! 疏水是表面的一些个别基团的作用,蛋白质的确是水溶的,因为有很多亲水的氨基酸,但是同样存在疏水的氨基酸,这样就会通疏水柱产生作用了.

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  • Surly

    第1楼2008/12/10

    疏水层析,是根据不同的蛋白与疏水表面产生的相互作用的差异,进行蛋白分离的一种方法。一般而言,离子强度(盐浓度)越高,物质所形成的疏水键越强。影响疏水作用的因素包括:盐浓度,温度,pH,表面活化剂和有机溶剂。疏水层析的应用与离子交换层析的应用刚好互补,因此,可以用于分离离子交换层析很难或不能分离的物质。
    在吸附层析中,高极性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用极性强的溶剂,如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,最先洗下来,得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反,故称为反相层析。
    我觉得这里的蛋白质是指的疏水性蛋白质,蛋白质根据R基团的性质分为疏水性和亲水性,我觉得这两种层析方法应该是用来研究疏水性蛋白质的。
    我不是搞生物的,只是发表一点自己的意见,有错误的话请谅解。

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  • It is me!

    第2楼2008/12/10

    1楼的说得非常对!!!

    疏水是表面的一些个别基团的作用,蛋白质的确是水溶的,因为有很多亲水的氨基酸,但是同样存在疏水的氨基酸,这样就会通疏水柱产生作用了.

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  • ashao

    第4楼2008/12/12

    也同意一楼的说法
    不过看来原文ms不是很严谨
    或者偶的理解不到位,呵呵
    谢谢指教
    结贴的时候金币

    jusiting 发表:疏水层析,是根据不同的蛋白与疏水表面产生的相互作用的差异,进行蛋白分离的一种方法。一般而言,离子强度(盐浓度)越高,物质所形成的疏水键越强。影响疏水作用的因素包括:盐浓度,温度,pH,表面活化剂和有机溶剂。疏水层析的应用与离子交换层析的应用刚好互补,因此,可以用于分离离子交换层析很难或不能分离的物质。
    在吸附层析中,高极性物质在层析柱上吸附较牢,洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类,洗脱液用极性强的溶剂,如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附,最先洗下来,得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反,故称为反相层析。
    我觉得这里的蛋白质是指的疏水性蛋白质,蛋白质根据R基团的性质分为疏水性和亲水性,我觉得这两种层析方法应该是用来研究疏水性蛋白质的。
    我不是搞生物的,只是发表一点自己的意见,有错误的话请谅解。

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