【求助】中药指纹图谱技术中的问题

1.色谱条件和样品处理方法是关键
2.梯度洗脱的确定看物质的复杂程度来定
3.用低比例走等度在走线性梯度

据我的了解，总结一下
中药指纹图谱
1.反映药材中的一类或几类成分（最常见的是某一类成分，比如黄铜，皂苷，一般不会超过两类，）在药材中的分布（相对含量）
2.反映药材不同部位（比如地上，地下）成分的差异
3.反映药材不同生长时期某类成分含量的变化
4.反映不同批次药材差异（一般用作工厂内控）
先要明确你的目的，再根据这一类成分的性质提取，纯化

复杂组分药材进行梯度洗脱时，有机相的初始浓度如何确定？
你可以做梯度实验
有机相从5%-80%（0-10min），看看峰主要集中在哪，算出此时有机相的浓度，再调一调

3、线性梯度洗脱，部分组分出峰时间很短（10分钟之内），部分却在40分钟左右才出峰，中间几乎没有什么峰，怎么解决？

加大10-40分钟间的梯度
考虑出峰早的是不是你要的一类成分（有可能是极性很大的杂质）
祝你好运！

我的目的是通过中药指纹图谱技术反映不同产地中药材的质量差别和真伪鉴别，您说有机相从5%-80%梯度洗脱，我也差不多是这样做的，具体办法是：B相（有机相）3%-100% 60min，进行梯度，最后按照这一基础进行细部调节，然而就在调节10-40min之间梯度时，出现影响中间一段峰分离度（就是k'下降，5个峰聚在一起）的情况，调节10min后的初始浓度很麻烦，也很费时，有公式之类的东东可以直接计算出来吗？

应助达人

没有公式，前期的调整大一点，差不多了再进行微调，做指纹图谱，药物的浸出是个关键，浸出不完全也就不能完全反应药物的情况，还是就是做几个主要成分，所有成分都进行准确定量那完全是不可能 的事。

不同产地也要确定主要做哪一类成分，再根据这一类成分的提取方法，纯化（如果是药材所含成分比较少的可以直接用高浓度乙醇或甲醇提取）
没有现成的公式
两相实在解决不了 就用三相 甲醇 乙腈 水
我以前指纹图谱就用的三相
试试吧

我在试试吧，多谢

弱弱地问句：如何从指纹图谱看中草药的质量差别和真伪鉴别？小弟看过一些资料，但是存在一些疑问，一直没整明白？

通过做多批次（10批以上）药材的hplc色谱图谱，选择出其中的共有峰（即指纹图谱），产生一个标准的对照图谱，然后将待检验的药材按照标准对照图谱的条件，作出色谱图，与标准指纹图谱比较共有峰的相似度，符合标准（>0.99以上）的为真品，否则为伪品；对共有峰中已知成分（有对照品）的指纹，进行含量测定，在最低标准以上的成分，含量越高，质量越好。

小弟对这个“标准的对照图谱”一直存在疑惑，中药材原料成分极其复杂，各个地区出产的药材可能会不尽相同。我不清楚有没有人做过这些实验？这些基础数据怎样？hplc色谱图谱是某一个波长下的所有有吸收的物质的图谱。如果原料已经进行了人为的加工（这些加工对原料的影响未知），在此情况下，实验室用标准方法来判定其真伪，会不会有漏洞？小弟一直不解，望交流学习。