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【讨论】如何实现基线分离?

液相色谱(LC)

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  • 请教各位专家:
    小弟在做某药材的指纹图谱时,用乙腈-酸水(万分之一的H3PO4)梯度洗脱,
    有三个皂苷的峰非常接近,大约梯度到50%乙腈-酸水时,66分钟的时候开始出峰,三个峰连在一起,能看见峰尖,但是没有实现基线分离。
    (1)指纹图谱需要把所有的峰都分开吗?
    (2)如何优化条件,把这三个峰基线分离?我尝试了等度,效果未见明显。
    请大家多提宝贵意见,十分感谢了!!!

wsy18 2009/07/19

应该是峰分离吧? 建议把谱图贴上来给大家看看。

老多_小多 2009/07/19

(1)指纹图谱只是要求尽量得到更多的峰 (2)不知道你梯度怎么设置的,我觉得走线性梯度应该可以

〓猪哥哥〓 2009/07/20

[quote]原文由 [B]101236[/B] 发表: 请教各位专家: 小弟在做某药材的指纹图谱时,用乙腈-酸水(万分之一的H3PO4)梯度洗脱, 有三个皂苷的峰非常接近,大约梯度到50%乙腈-酸水时,66分钟的时候开始出峰,三个峰连在一起,能看见峰尖,但是没有实现基线分离。 (1)指纹图谱需要把所有的峰都分开吗? (2)如何优化条件,把这三个峰基线分离?我尝试了等度,效果未见明显。 请大家多提宝贵意见,十分感谢了!!![/quote] 1.如果要把所有峰都分开,那是不可能的,否则分析时间过长。把主要的一些特征峰给分离出来。 2.梯度表设置阶梯式模式,也可以通过改变酸的浓度和酸的种类来解决。

tiantiantansepu 2009/07/23

版主你先最好吧谱图先发过来看看[em09505]

GG 2009/07/23

指纹说起来貌似作用很大,但是其实没有很好的实用性,不同产地的中药,其有效成分的差异可能很大,但是有几个真正的用指纹来验证的?几乎没有,最重要的是,不同的柱子,甚至不同的仪器做不来的图谱都不一样。其重现性没有想象中那么高,柱子不同导致图谱有差异,甚至是两个同一厂家的柱子做出来的图谱都有比较大的差异,这个我深有体会。所以除非是万不得一,不要做指纹了,我们在答辩的时候,我们请的老师根本就不听指纹的相关内容,呵呵,就差直接说了:你这部分不用答辩了,直接到下一部分吧。但是我有个做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]的同学,做的全部都是指纹,答辩老师都无语了,最后说,好了,你下去吧!

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  • wsy18

    第1楼2009/07/19

    应该是峰分离吧?
    建议把谱图贴上来给大家看看。

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  • 老多_小多

    第2楼2009/07/19

    (1)指纹图谱只是要求尽量得到更多的峰
    (2)不知道你梯度怎么设置的,我觉得走线性梯度应该可以

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  • 〓猪哥哥〓

    第3楼2009/07/20

    1.如果要把所有峰都分开,那是不可能的,否则分析时间过长。把主要的一些特征峰给分离出来。
    2.梯度表设置阶梯式模式,也可以通过改变酸的浓度和酸的种类来解决。

    101236 发表:请教各位专家:
    小弟在做某药材的指纹图谱时,用乙腈-酸水(万分之一的H3PO4)梯度洗脱,
    有三个皂苷的峰非常接近,大约梯度到50%乙腈-酸水时,66分钟的时候开始出峰,三个峰连在一起,能看见峰尖,但是没有实现基线分离。
    (1)指纹图谱需要把所有的峰都分开吗?
    (2)如何优化条件,把这三个峰基线分离?我尝试了等度,效果未见明显。
    请大家多提宝贵意见,十分感谢了!!!

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  • tiantiantansepu

    第4楼2009/07/23

    版主你先最好吧谱图先发过来看看

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  • GG

    第5楼2009/07/23

    你在60分钟左右的时候把乙腈的量降低到55%看看,这个比例及时间不一定合适,你尝试下才知道,我曾经做过钩藤总碱的分析,非常的难,但是最终还是分开了,就是把梯度走上去之后再走下来(有机相的比例降下来),再走上去。梯度都分部开,等度就更不行了。

    另外:如果不是为了发表文章或者占毕业论文的页面,建议不要做指纹了,说真的,现在指纹越来越不被重视,要不早就进药典了,现在与内部人士交流的时候,指纹都要取消了。

    03yx2 发表:1.如果要把所有峰都分开,那是不可能的,否则分析时间过长。把主要的一些特征峰给分离出来。
    2.梯度表设置阶梯式模式,也可以通过改变酸的浓度和酸的种类来解决。

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  • GG

    第6楼2009/07/23

    指纹说起来貌似作用很大,但是其实没有很好的实用性,不同产地的中药,其有效成分的差异可能很大,但是有几个真正的用指纹来验证的?几乎没有,最重要的是,不同的柱子,甚至不同的仪器做不来的图谱都不一样。其重现性没有想象中那么高,柱子不同导致图谱有差异,甚至是两个同一厂家的柱子做出来的图谱都有比较大的差异,这个我深有体会。所以除非是万不得一,不要做指纹了,我们在答辩的时候,我们请的老师根本就不听指纹的相关内容,呵呵,就差直接说了:你这部分不用答辩了,直接到下一部分吧。但是我有个做气质的同学,做的全部都是指纹,答辩老师都无语了,最后说,好了,你下去吧!

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  • 101236

    第7楼2009/07/23

    这位朋友,你说的60分钟的时候把乙腈的量降低到55%,不太明白,我试验过程中,60分钟的时候也就是50%。不过,你在提到梯度控制的时候,好像是迂回战术,确实值得借鉴。谢谢!

    xietg 发表:你在60分钟左右的时候把乙腈的量降低到55%看看,这个比例及时间不一定合适,你尝试下才知道,我曾经做过钩藤总碱的分析,非常的难,但是最终还是分开了,就是把梯度走上去之后再走下来(有机相的比例降下来),再走上去。梯度都分部开,等度就更不行了。

    另外:如果不是为了发表文章或者占毕业论文的页面,建议不要做指纹了,说真的,现在指纹越来越不被重视,要不早就进药典了,现在与内部人士交流的时候,指纹都要取消了。

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