【求助】高效液相色谱 基线噪声很大

测定完后没用纯甲醇冲？

极限噪音大有以下几方面原因
1、柱子脏，需要冲洗
2、流动相不平衡
3、泵流速不稳
4、有漏液
请逐项检查

色谱柱和色100% Hexane ★ 已烷
★
Wear gloves 戴手套
Do not allow bed to dry 不要让底座干燥
Do not touch the column-body heat will extrude packing 不要使柱身受热,否则填料会喷出
Do not over tighten 不要旋得太紧
Female End Fitting 旋好尾端螺母
Male
从泵来的流动相 保护柱

Analytical
Column
Filter and Guard Column Act on Sample 分析柱
滤头和保护柱作用于样品
Pre-Column Acts on Mobile Phase
预柱作用于流动相 To Detector
到检测器

Preventing Back Pressure Problems: Sample Preparation压力问题的预防:样品制备
Solvent/Chemical Environment
溶剂/化学环境
Particulate/Aggregate Remove
微粒/凝聚物的除去
Filter samples 过滤样品
Centrifugation 离心分离
Solid Phase Extraction(S.P.E.) 固相萃取
Cartridges or Plates 薄膜或薄层板
Disks or Membranes 圆盘或生物膜
Peak Shape Issues 峰形问题
Split peaks 裂峰
Peak tailing 峰拖尾
Broad peaks 宽峰
Poor efficiency 低柱效

Many peak shape issues also combinations-I.e. Broad and tailing or 苯三胺

pH 3.0 pH 7.0
USP QC test after cleaning
100% IPA, 35ºC
向前方向 相反方向 100%异丙醇冲洗后
Peak Tailing/Broadening Sample Load Effects峰拖尾/变宽样品过载效应
Column: 4.6 × 150mm, 5µm
Mobile Phase:40%25mM Na2HPO4,pH7.0 : 60%ACN
Peak Broadening,Splitting Column Void 峰变宽,裂开 柱塌陷
Mobile Phase:流动相：
50%CAN : 50%Water : 0.2%TEA (~pH 11)
50％乙腈 : 50％水 : 0。2％三乙胺 (~pH 11)
After 30 injections Initial 开始时
进样30次后

多数峰形改变可能是同一柱问题引起的。在这个例子中，高pH溶解硅胶导致塌陷
Broad Peaks Unknown “Phantom” Peaks
Column: Extend-C18, 4.6 × 150 mm, 5 µm


compounds pH 4.5 显示批与批之间对碱性化合物的选择性改变
pH 3.0 shows no selectivity change from lot-to-lot, indicating silanol sensitivity at pH 4.5 pH 3.0显示批与批之间对碱性化合物的无选择性改变,表明在pH 4.5硅醇基的灵敏性
Conclusions 结论
HPLC column problem are evident as: 高效液相色谱柱问题明显的为:
High pressure 高压
不希望得到的峰形
保留时间/选择性的改变

经常遇到的这些问题不一定与柱有关,而与仪器和实验条件方面的问题有关

泵的流速调节为1.4ml/min，，泵压有点不稳，该怎么解决？

每天工作结束后，用90%甲醇-水冲30分钟。这样对系统有好处。