【原创】紧急求助：用HPLC分析3、4、5-三羧酸苯胺相关问题（研究生色谱课考试题，不会，所以求助高手）

合成路线怎么不能上传啊？

怎么没人关注呢？？！！不会是我人品有问题吧？呵呵O(∩_∩)O~

饿，发现不对，要试验才知道

这就是一道考题，是没时间去试验的，需要用液相色谱的有关知识来解答。

不会啊，谢谢啦！

问题1：如上进行实验检测购买的标准品，发现主峰A：RT=4min,在RT=12min处有杂质B。按面积归归一法计算，A%=90%，B%=10%。但出厂报告单表明化合物浓度大于99%。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。


样品和三氟乙酸发生反应，生成了另外一个杂质，改变方法，更换其他的流动相，就可以得出正确结果。（这个比较确定，TFA浓度太高了）





问题2：问题解决完成以后，测试合成产品的质量，发现与对照品一致，纯度很好，于是出具合格单，产品卖出。但客户却反馈回来说明化合物只有90%的含量。请分析原因，并解决此问题，最终得到正确的HPLC结果。


客户得出的结果和问题1的结果一样，客户也许也是使用了同样的方法。（这个不确定）






问题3：采用问题1得到的方法进行含量分析，发现结果很好。但是采用亚硝酸或酸碱滴定，发现化合物含量只有90%左右，请分析此产品的纯度好坏，还可以用什么方法来判断此产品的纯度。


苯胺与亚硝酸反应生成重氮盐，由此盐可制成一系列苯的衍生物和偶氮化合物。
亚硝酸滴定是不对的；苯胺本身就是双性的，酸碱滴定的时候NH2会影响结果。其他方法的话，就是GC了

问题4：从问题1、2、3，说明HPLC的正确使用？


自己总结吧，主要问题就是流动相不能和样品发生可逆反应。

应助达人

1、你的色谱方法是自己开发的吗？杂质与主成分的校正因子不在0.9-1.1之间的话，不能以归一法直接计算纯度，即使在0.9-1.1之间，也常用自身对照法。
2、你的标准品是哪里购买的，99%纯度可信度有多高，可以用对照品外标法检测样品的含量。
3、滴定法的没有太深的研究。

1.色谱条件与标准品的测试条件是否一致？从被测物的结构来看，流动相中含有三氟乙酸，有问题。
定量测定，不采用面积归归一法计算。标准品中的杂质有可能在215nm检测波长下有很好的紫外吸收。
2.用户的检测方法是否和你一致？方法不一样，会有很大的测定误差。
3.化学法测定要排除干扰因素。

既然你的标准品做出来两个峰，做过核磁没有，能不能确定你的标准品有问题还是分析方法有问题，这个问题需要清楚，否则其他工作都是白费。如果标准品比较纯，你可以试着换换流动相，从你所要测试的化合物结构看先做个中性，把峰冲出来看看情况（中性体检应该对该化合物没有影响），之后再调PH，柱子，柱温等等条件。低波长的最好不要用三氟乙酸，想用酸性的话考虑一下磷酸吧！

谢谢5、6、7、8楼的高手啦！我再好好考虑。
这是老师发下来的一张试卷里的一道考题，老师的意思就是分析结果与报告单的结果出现差异，叫用液相色谱方面的知识进行解答

非常感谢了！