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【求助】急求助用分光光度计做曲线的问题

  • hellomyson
    2010/02/19
  • 私聊

紫外可见分光光度计(UV)

  • 急求助:
    这是我所用方法做曲线的步骤“A:分别移取0(补偿溶液),2,4,6,8,10毫升羰基化合物标准溶液置于6个100毫升容量瓶中,用无羰基的甲醇稀释至刻度,摇匀。每2毫升此标准溶液分别含有(0,10,20,30,40,50)微克羰基化合物。 B:吸光度的测定 向6个25毫升容量瓶中分别移取2毫升标准比色溶液,各加入2毫升苯肼,反应30分钟,用氢氧化钾-甲醇稀释至刻度,放12分钟。用1厘米比色皿,在430纳米处,以水调整分光光度计零点,测定上述溶液的吸光度。 C:绘制标准曲线 用标准比色溶液的吸光度减去补偿溶液的吸光度为纵坐标,以相对应的标准比色溶液中羰基化合物的质量(微克)为横坐标,绘制标准曲线。"
    样品测定同上,计算公式(m1-m2)*0.0001/m

    m1-与试样吸光度相对应的由标准曲线上查得的羰基化合物的质量

    m2-与空白吸光度相对应的由标准曲线上查得的羰基化合物的质量

    m-试样的质量

    我的疑问:1.用水调零和不用水有区别吗?可不可以用补偿溶液做空白直接测其他各个标准液的吸光度,以他们的吸光度为纵坐标,质量为横坐标做曲线?如果这样可以的话,公式里的吸光度对应的数值应该只有一个吧?
    2.我用的是UV2450,像这样,在软件上好操作吗?

    3.uv2450,auto zero(自动调零)与cell blank(池空白)有何区别?各在什么情况下用?

    版主解答如下:

    看完你的帖子,我觉得你的补偿溶液就是你的试剂空白,而用水调零,我暂时称为水空白,更像是在做参比,2450应该是双光束的,建议你把水空白直接放置在参比光束上就可以了。

    直接用补偿溶液做参比,测定各个标准系列的方法是可行的,不过还是建议你对比一下,如果偏离标准方法对测定结果的影响比较大的话,建议你还是按照标准方法进行操作。

    UVprobe软件在做标准曲线的时候,好像不能自动减去试剂空白的吸光值,建议你用试剂空白去调零,这样就可以直接减去,方便楼主操作。这样的话仪器读数出来的吸光值就是差值了,不用在减了。
    2.
    我用的是UV2450,像这样,在软件上好操作吗?

    软件是很好实现的,如果还有其他的操作问题,和我联系
    3.uv2450
    auto zero(自动调零)与cell blank(池空白)有何区别?各在什么情况下用?

    池空白的意思是在没有放入任何溶液的时候,测定吸收池的吸光值,这样做的目的是为了扣除吸收池本身对测定结果的影响。

    在没有这个功能的情况下,要进行吸收池的配对,才能使用。有了这个功能,就可以不配对而直接减去池空白了,使用起来比较方便。

    自动调零是对你的空白溶液而言,在测定过程中调零用的,建议千万不要把两个概念混淆。
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  • tutm

    第1楼2010/02/20

    疑问:1.有区别,要看你使用的标准方法是如何规定的,现在你们的做法是考虑了空白液测试误差在内的。但如果是你们自己设计方法,如果空白液足够稳定的话,应该可以用补偿溶液做空白。你上面写的m0就是m2吧?
    2. 没用过2450,但这些操作和运算都是很基本的,软件中应该有此功能。

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  • 祥子

    第2楼2010/02/20

    看看此帖。

    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20060629/470529/

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  • hellomyson

    第3楼2010/02/20

    不好意思,把m2写成了m0
    "有区别,要看你使用的标准方法是如何规定的,现在你们的做法是考虑了空白液测试误差在内的",我还是不明白,是不是因为补偿液不稳定,所以调零的时候才考虑用水调零的?
    还有,假设以水调零,测的补偿液的吸光度读数是0.12,其他5个标准液的分别是0.24,0.36,0.48,0.60,0.72,做曲线的时候是不是吸光度分别应该是0.12,0.24,0.36,0.48,0.60呢(5个标准液的吸光度分别减去补偿液的吸光度,补偿液的0.12不变)?

    tutm(tutm) 发表:疑问:1.有区别,要看你使用的标准方法是如何规定的,现在你们的做法是考虑了空白液测试误差在内的。但如果是你们自己设计方法,如果空白液足够稳定的话,应该可以用补偿溶液做空白。你上面写的m0就是m2吧?
    2. 没用过2450,但这些操作和运算都是很基本的,软件中应该有此功能。

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  • wengjx1980

    第4楼2010/02/20

    补偿液是否稳定,可以在测试过程中验证,放置一定时间后测一次补偿液的吸光度,多测试几次就知道了。
    如果补偿液稳定,用补偿液更好一点

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  • tutm

    第5楼2010/02/20

    呵这个区别主要是统计学上的差别,使用蒸馏水调零主要是能将你的空白液配制误差也考虑进去。我的意思是如果空白液足够稳定,它带来的影响是很小的,可以直接使用空白液做参比的。但是如果你所使用的标准方法中规定用蒸馏水,那你还是应该按标准操作。
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    “还有,假设以水调零,测的补偿液的吸光度读数是0.12,其他5个标准液的分别是0.24,0.36,0.48,0.60,0.72,做曲线的时候是不是吸光度分别应该是0.12,0.24,0.36,0.48,0.60呢(5个标准液的吸光度分别减去补偿液的吸光度,补偿液的0.12不变)?”
    这儿其它5个溶液的吸光度不能减去“补偿液的吸光度”

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  • hellomyson

    第6楼2010/02/20

    “C:绘制标准曲线 用标准比色溶液的吸光度减去补偿溶液的吸光度为纵坐标”怎么理解?

    tutm(tutm) 发表:呵这个区别主要是统计学上的差别,使用蒸馏水调零主要是能将你的空白液配制误差也考虑进去。我的意思是如果空白液足够稳定,它带来的影响是很小的,可以直接使用空白液做参比的。但是如果你所使用的标准方法中规定用蒸馏水,那你还是应该按标准操作。
    -
    “还有,假设以水调零,测的补偿液的吸光度读数是0.12,其他5个标准液的分别是0.24,0.36,0.48,0.60,0.72,做曲线的时候是不是吸光度分别应该是0.12,0.24,0.36,0.48,0.60呢(5个标准液的吸光度分别减去补偿液的吸光度,补偿液的0.12不变)?”
    这儿其它5个溶液的吸光度不能减去“补偿液的吸光度”

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  • tutm

    第7楼2010/02/20

    哦,没注意主贴中的这句,那就减吧。这是曲线平移一下,使截距为零了,就是补偿液吸光度移到零点了。

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  • 初学者&九点虎

    第8楼2010/02/20

    明天帮你解答

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  • hellomyson

    第9楼2010/02/21

    补偿液的吸光度按0算还是按0.12算来求曲线?

    tutm(tutm) 发表:哦,没注意主贴中的这句,那就减吧。这是曲线平移一下,使截距为零了,就是补偿液吸光度移到零点了。

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  • tutm

    第10楼2010/02/21

    按0算

    hellomyson(hellomyson) 发表:补偿液的吸光度按0算还是按0.12算来求曲线?

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