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【讨论】新柱子为什么在甲醇-三氟乙酸体系下这么短命?

液相色谱(LC)

  • C18柱,5um,工作流速0.8ml/ml,强溶剂为添加0.1%三氟乙酸的甲醇,样品为多肽,柱压在180bar左右,新启用的柱子在进样20-50针以后样品的峰形就变得很差了(但是用其他的分离体系如缓冲盐体系走样品还是好的),无法达到基线分离要求,请问这是怎么回事呢?是柱压高的原因吗,还是因为三氟乙酸的原因?望不吝赐教!
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  • 〓猪哥哥〓

    第1楼2010/04/06

    柱压在进了20-50针以后会逐渐升高吗?个人觉得是三氟乙酸的问题

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  • 有水有渝

    第2楼2010/04/06

    应助达人

    用其他的分离体系如缓冲盐体系走样品还是好的,走的也是多肽吗?如果不是,那么也可能是柱子对做多肽耐用性差,加保护柱了没有?

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  • 哇咔咔

    第3楼2010/04/06

    你查下流动相PH值,如果PH没有问题.应该就不是流动相的问题.考虑下是不是柱子的问题.是不是有的东西残留在柱子里,没有洗脱下来.

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  • sjw428

    第4楼2010/04/06

    流动相的pH值是不是低了一些呢?

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  • 1818

    第5楼2010/04/06

    应该是你流动相的PH低于色谱柱最低使用PH的缘故所致的吧!!

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  • wmmsx

    第6楼2010/04/06

    柱压基本不变,就是峰形变差,峰展宽,拖尾,从而导致分离度下降

    〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:柱压在进了20-50针以后会逐渐升高吗?个人觉得是三氟乙酸的问题

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  • wmmsx

    第7楼2010/04/06

    是走同样的多肽样品。没加保护住,只有在线过滤器。

    欧冠+世界杯(xky0230699) 发表:用其他的分离体系如缓冲盐体系走样品还是好的,走的也是多肽吗?如果不是,那么也可能是柱子对做多肽耐用性差,加保护柱了没有?

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  • wmmsx

    第8楼2010/04/06

    是走同样的多肽样品。没加保护住,只有在线过滤器。

    其它的流动相可以,说明其它流动相更适合,那你为什么还要用三氟乙酸体系的吗?

    欧冠+世界杯(xky0230699) 发表:用其他的分离体系如缓冲盐体系走样品还是好的,走的也是多肽吗?如果不是,那么也可能是柱子对做多肽耐用性差,加保护柱了没有?

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  • wmmsx

    第9楼2010/04/06

    流动相pH在1.9左右,柱子pH耐受下限为1.5。

    xyhdcm2002(xyhdcm2002) 发表:应该是你流动相的PH低于色谱柱最低使用PH的缘故所致的吧!!

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  • wmmsx

    第10楼2010/04/06

    是有这种可能,但是用95%的乙腈和纯甲醇冲洗无效。

    哇咔咔(feixue810316) 发表:是不是有的东西残留在柱子里,没有洗脱下来.

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