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【求助】求助:梯度洗脱问题??

液相色谱(LC)

  • 我最近在提纯微生物发酵产物,用反相的C18柱和正相的硅胶柱还有佛罗里硅土柱都做了一次。
    反相的C18采用甲醇/水梯度洗脱,水溶液上样,加过发现第一次用纯水洗就下来了。紫外扫描峰也很杂。
    正相的硅胶采用氯仿/甲醇梯度洗脱,甲醇氯仿1:1上样,结果也是第一次甲醇氯仿1:1就全洗下来了。这个紫外峰还没扫。
    佛罗里硅土采用氯仿/甲醇梯度洗脱,甲醇氯仿1:1上样,结果纯的甲醇也洗不下来了。
    非常郁闷啊。各位高手谁能提点意见啊?我现在的这个物质目前只能溶解在水和甲醇里,乙酸乙脂和氯仿以及石油醚都不溶解。极性应该蛮强的。
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  • popshengu

    第1楼2010/05/08

    是周末嘛?怎么没大侠知道的?

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  • 有水有渝

    第2楼2010/05/08

    应助达人

    建议先用TLC或液相色谱调整洗脱剂,才能知道用什么洗脱剂合适。

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  • popshengu

    第3楼2010/05/09

    我这个东西只能在水和甲醇种溶解。甲醇和什么极性弱的混溶效果好啊?

    有水有渝(xky0230699) 发表:建议先用TLC或液相色谱调整洗脱剂,才能知道用什么洗脱剂合适。

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  • 有水有渝

    第4楼2010/05/09

    应助达人

    酯类,乙醇,顺便问一下,你如何确定洗没洗下来?

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  • 〓猪哥哥〓

    第5楼2010/05/10

    调整下甲醇-氯仿的比例减小洗脱强度再试试。每次洗脱出的应该先做tlc,如果纯度稍较高,再纯化,最后才会扫描吧,刚洗脱出扫描出来的图谱肯定不行

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  • popshengu

    第6楼2010/05/11

    梯度洗脱后每个梯度都没有活性,就是没洗下来了。最后用纯甲醇洗了6个体积,将近30ml的量,还是没活性。应该确定是洗不下来。

    有水有渝(xky0230699) 发表:酯类,乙醇,顺便问一下,你如何确定洗没洗下来?

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