【转帖】反相色谱柱的维护

应助达人

反相柱子污染的产生

通常，样品中含有一些对分析者来说不感兴趣的物质。盐、脂质、含脂物质、腐质酸、疏水蛋白质和其它一些生物物质是一些可能在使用时与HPLC柱发生相互作用的物质。这些物质有比分析者的目标物或小或大的保留值。那些保留值较
小的物质和盐类一般来说在空体积时就被冲出色谱柱。这些非目标产物的干扰能被检测器检测到而且能形成色谱峰、气泡、基线漂移或者负峰。如果样品成分在柱子中有很强的保留，而且流动相溶液成分不足以把这些物质洗脱下来，多次进
样后，这些物质通常就会积累在柱头，污染色谱柱。

当柱子被污染，它的色谱行为和没被污染的柱子会有些不同。被污染的柱子会产生反压(污染严重时，柱子的反压能超出输液泵所能承受的最大压力)、峰形变坏(拖尾、分叉等)、保留时间改变，使色谱柱无法正常工作。

应助达人

反相色谱柱的清洁和再生

被污染的色谱柱必须清洗和再生才有可能改善柱子的性能。再生被污染的Ⅲ c柱子的关键是知道污染物的性质，并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为。有时候，经过多次进样以后的色谱柱用90～100％的较强的溶剂冲洗20个柱体积可以清除污染物。柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙腈、四氢呋喃。如果你使用的是缓冲溶液系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度的有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲溶液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄露、柱塞损伤或进样阀转轴失灵等。应该先用无缓冲流动相(即把缓冲溶剂换成水)冲洗5～10个柱体积以后才更换强溶剂。

有时候，强溶剂也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉，压力仍没下降，将色谱柱反方向连接，用0．5ml／min的流速冲洗1小时，若柱压仍高，则色谱柱内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。但柱连接端的拆卸或重装会导致柱效下降(有效塔板数下降和不对称峰)：若色谱柱的柱头填料发生污染，柱子将不能被彻底恢复，只能通过去掉进口端的部分填料(2-5mm)，重新填充，进行有效的柱效恢复。

一般来说，所有的清洗方法都有类似的形式。我们必须保证一系列溶剂中每个溶剂都能与下一个溶剂互溶。清洗过程要结束时，必须借助一个中等强度能互溶的溶剂而回到原始溶剂系统。例如，异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的
溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶，又能与水相溶剂互溶。但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。当然，如果使用紫外检测器时，应避免溶剂在紫外区有吸收，否则需要使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。

对于典型的硅胶键合柱来说，如果没有缓冲溶液，此时用不同极性的一系列溶剂冲洗有可能解决问题。如分别用100％甲醇、100％乙腈、75％乙腈一25％异丙醇、100％异丙醇、100％~-氯甲烷、100％正己烷依次冲洗。用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶剂相溶性，柱子必须用异丙醇冲洗后，才能用原来的水相溶剂。每种溶剂至少冲洗10个柱体积。成功再生反相柱子是一个非常耗时间的过程。

应助达人

色谱柱是液相色谱系统获得分离的中心部件，许多分离问题都归结于色谱柱。柱故障主要是机械、色谱或者化学方面的原因引起的，维护色谱柱和排除故障，需要懂得液相色谱的分离过程以及色谱柱本身的构造是非常重要的。色谱柱的价格昂贵，应避免人为地损坏，并尽可能延长其寿命。

谢谢楼主的分析

好东西，占为己有了，呵呵

很好的维护资料

维护资料很简单,还是很适用的

快乐有没有用二氯甲烷冲过？

应助达人

这只是手头的资料，自己没有用过。我们一般用于检测的色谱柱，柱效低了，就算报费了，所以，我们也不用于维护。只是试着玩的心态是会弄一下。