【基础知识】生物透射样品制样基本流程

透射电镜生物样品制备步骤

一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：   
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗     15分 三次
1%锇酸固定液固定        2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗     15分 三次
三．脱水：   
50%乙醇            15-20分
70%乙醇            15-20分
90%乙醇            15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1）    15-20分
90%丙酮            15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮    室温    15-20分三次
四．包埋：   
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜
纯包埋液        37度 2-3小时
五．固化：   
37度烘箱内        过夜
45度烘箱内        12小时
60度烘箱内        24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片

好复杂啊,学习了

复杂才能学东西吧，呵呵。生物电镜制样就是最主要的工作，看电镜倒是次要的。

很复杂的流程。没有试过。

有人做够聚合物吗？是否聚合物也得严格按照此流程？

高分子大概只有包埋切片吧，最后染色？要问juejueld。

我们都是直接用丙酮脱水，不过包埋剂渗透的剃度比这个还要多几步～～

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你是指做高分子样品吗？能否告知包埋剂渗透的剃度是个什么概念？

请问您是做什么方面的样品？我看到的脱水步骤基本就是这几个，难道你们的样品更脆弱？

我的样品是昆虫，虫体本身就很小，比1mm还小点，基本制样也如上所述，就是在包埋时容易散开，见有人用琼脂糖聚集样品，但什么时候用？怎么处理？请教各位！^0^