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【第三届网络原创参赛作品】HPLC保留时间不稳定案例分析

液相色谱(LC)

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    起因:最近利用液相分析时,目标峰飘忽不定,故有以下文字

    一 出峰不稳定示例:


    以下都是出峰时间不稳定的示例:【可以忽略不看:总结一句话,出峰时间出现异常)】
    1):在做油酸的高效液相方法建立,可是选定的色谱条件下保留时间极其不稳定,同样的样品,两针之间差别都较大(前后进4针,用时大约2 h,保留时间由6.539变到5.868 min)。色谱条件:乙腈:水=8:2;流 速:2ml/min;柱温:20度;波长:205 nm;色谱柱:C18
    2)类似问题。有朋友购买的色素标准品报告上的保留时间是: FUCO:17.55, HEX:19.10, ALLO:21.76, ZEA:21.93. 我单个标样分别上样多次测得的保留时间数据为:FUCO:18.329-18.556,HEX:18.592-18.777,ALLO:24.665-24.896,ZEA:25.974-26.054.保留时间算是很稳定了。但是当将保留时间相近的FUCO与HEX混合,ALLO与ZEA混合测得的保留时间为:FUCO:17.63,HEX:18.90。ALLO:24.54,ZEA:25.97。FUCO保留时间提前,HEX保留时间延后,ALLO,ZEA与单个上样的保留时间基本一致。 当4种一起混合再上样时的保留时间为:18.58, 19.80, 24.53, 25.96。与单个上样相比,前两种的保留时间又都延后了,后两种基本没变。请大家帮忙分析一下是什么原因?
    ////友人观点:应该是柱子的选择性对这四种成分竞争性抑制的关系。楼主的情况,看看柱压是否稳定,如果是柱压稳定,考虑液相是否有残留溶剂,还有最后再考虑柱子的类型在分离这种化合物时是否不稳定。////
    3)做液相分离,前一天晚上还是正常的,第二天做的时候发现峰延后了10多分钟,无法找到原因!延后一分钟内还可以理解,但10min就不能接受了,机器安捷伦1100液相,手动进样!反相柱
    解决方法:我换了流动相(乙腈,我用的是乙腈和水),倒掉,重新装瓶,可还是不行,我索性将原装的大瓶乙腈也换掉,换了没开封的,但还是这个牌子的,就正常了!之前也一直怀疑流动相有问题,但这种情况还是纳闷!
    ////补充 乙腈的挥发性很强,流动相一定要密封好////

    4) 标线测定出峰时间不断前移【我的问题,我的回答为8,欢迎大家批下】

    其中1,2 均未讨论得出解决方法和有效手段,3为提问人自己解决问题,板油补充,道破事实

    二 产生这一现象可能因素及原因

    1) 柱流速,柱压稳定程度,通道数量,柱平衡时间(流动相是否是梯度的,梯度是否合适,此外,酸碱性对保留时间也有影响),原因主要是流速与柱压影响样品在管路中流动时间,从而影响到出峰。
    2) 温度
    3) 泵中有气泡
    4 )缓冲盐:(缓冲盐可以保证待测成分在流动相中成分子状态,因为分子状态和离子状态下的色谱保留行为是不一样的,你用的流动相是水,时间长了,待测成分分解,保留时间会缩短,这也是很正常的)
    5 )乙腈挥发 (流动相缓慢变化)
    6) 流动相比例配错了,试剂放置错误 ////溶剂的标签,////
    7) 有机相管路堵塞
    8 )若为标准溶液,二级母液中溶剂与标线母液存在差异,产生偏移??{注:本人二级母液为乙腈,标线为KCl溶液,母液用量从0.5-6ml定容到100ml,流动相为甲醇,测量出峰时间随溶液浓度提高迁移(乙腈含量升高),本人拙见,如有其他说法,欢迎拍砖}////经过思考,进样量是10uL,所以,乙腈的影响可以忽略,设置温度范围,柱子延长平衡时间,问题解决,主要原因可能是温度和柱子平衡问题引起。
    9)流动相污染,色谱柱逐渐吸附
    10)疏水坍塌 (当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时,有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留)

    三 小结

    出峰时间不稳定,主要有两种因素:1机器问题,包括机器平衡,温度,管路堵塞等,柱子故障等,2 人为因素,包括试剂配制错误,试剂放置错误管路,试剂挥发等。

    因此,在日常试验中,必须养良好习惯,平衡机器到稳定状态再测试样品,避免仪器未就绪引起麻烦;对于试剂配制,放置等仔细操作,必要地方贴明显标志;保持机器处于稳定环境中间。

    欢迎提出异议,不断提升
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  • 老多_小多

    第1楼2010/07/20

    怎么看的感觉乱呀,本来是不错的分享,是我的理解不够?还是楼主没整理好,呵呵

    要参加原创比赛吗

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  • sisha

    第2楼2010/07/20

    重新理了下,最近在想这个问题,希望不吝赐教

    不知道比赛怎么参加

    老多_小多(emoc98311) 发表:怎么看的感觉乱呀,本来是不错的分享,是我的理解不够?还是楼主没整理好,呵呵

    要参加原创比赛吗

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  • 有水有渝

    第3楼2010/07/20

    应助达人

    我看了,就是讲一个问题,保留时间漂移问题,其中有他人回复的(也举了一个自己类似的经历),也有自己的推测和实验。关键是楼主的编号有点小问题,本来只有一个问题的,让人看起来像好几个问题。

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  • 老多_小多

    第4楼2010/07/20

    你只要修改下主题词,
    参考这个
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100702/2644195/
    不过你的作品最好再整理下,那样才更有可能得奖品嘛

    sisha(sisha) 发表:重新理了下,最近在想这个问题,希望不吝赐教

    不知道比赛怎么参加

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  • sisha

    第5楼2010/07/21

    修改好了,大家继续拍,改可上次错误认识,乙腈在标液中含量不会引起峰出现大的偏差,(10ul的进样量,可以基本忽略它的影响)

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  • ahuadicp

    第10楼2010/07/29

    我想是油酸与流动相之间的问题

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  • 小不董

    第11楼2010/08/03

    应助达人

    流动相的影响是最大的,温度和溶剂也有一定的影响,至于你说的单标的时间推迟了,你可以配个混标看保留时间是否有变化,样品间有可能有竞争,也有可能溶剂浓度变小了,样品的峰就提前了。

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  • cxbabc

    第12楼2010/08/09

    保留时间延迟10min,确实问题比较严重。
    我觉得主要是流动相管路用错或管路中有气泡。
    分析:1.仪器的平衡、温度、管路堵塞,你可以在仪器上看出异常的;
    2.柱子的故障不会因为你更换新试剂就变好的。
    3.试剂配制错误,试剂挥发的问题,在你换过一次试剂的时候就可以解决的。

    这是我自己的理解,欢迎大家指正! 谢谢!

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  • pandora98

    第14楼2010/09/06

    1.保留时间不稳定,首先检查仪器的问题,同一个样品连续进5针,看看保留时间重复性怎么样??如果偏差超过一分钟,很可能是仪器出故障了。
    2.流动相最好是用机器混合,这样不会有流动相比例改变的问题
    3.没有柱温箱会对样品保留时间有影响
    4.流动相最好能添加0.1%磷酸,这样能使有些样品全部水解成离子,保留时间能更稳定一些

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