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【第三届原创参赛】药物分析过程中高效液相使用维护的个人体会（7月份）

hehu2010

2010/07/20

化学药检测

维权声明：本文为hehu2010原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

在做药物含量分析的时候，现在大家用的最多的仪器应该是有高效液相色谱仪的。但在使用过程中，有很多人对这些仪器不是很熟悉，因此有必要进行一些培训，或是接受一些应用者的经验。在这里，我讲讲我的一些个人体会，抛砖引玉。

我用的最多的高效液相色谱仪是agilent的色谱仪，1100和1200都用过，感觉还行。

1. 了解色谱仪构造。

要想用好色谱仪，首先要了解这些仪器的构造及功能。其实一台仪器就好比一个人，他有通道系统，分析、检测系统，相当于人的消化系统，神经系统。人吃了脏东西会生病，精密的色谱仪吃进去流动相和样品不纯洁，就会出现各类问题，其实很多色谱仪的问题就是这样导致的。除了电源系统，其他结构见下图。

1.1储液器

储液器的作用是储存HPLC流动相，由于Agilent1200使用的是四元低压梯度装置，因此一般有四个储液瓶，其中有一个是棕色瓶，他是用来储存液相用水的，因为水最容易变质，尤其是在光照下，因此这个瓶子最好不要换来换去的，他是有特定作用的。

储液瓶内各有一个高效液相溶剂入口过滤头，这个过滤头很容易脏，特别是装非有机相的储液瓶的。过滤头的清洗一般拿5%用5%的浓硝酸浸泡即可，不要拿去作超声处理，以免震碎过滤头，要知道，这个过滤头还是很贵的，几百元一个。

连接溶剂入口滤头的管道也很容易长有霉菌，一般可以开用一定浓度的氢氧化钠溶液浸泡，但由于通道细小，往往不管用，因此这里提供一个土办法，即拆下管道后，从一端塞入大小合适的脱脂棉，用针管从另一端抽出，反复几次，即可将内部清洗干净。

1.2脱气机

脱气机的原理是将通道内的气体用脱气泵通过半透膜（气体能通过，液体不能通过）脱去，当流动相很脏的时候，就很容易将半透膜堵塞，这样脱气机就没法工作了，但是四元低压梯度的色谱仪四个通道脱气是独立的，一个通道堵了，其他三个还是可以继续使用的。一般检测脱气机是否正常，就是从该通道放入一小段气泡，开启脱气机，观察出口，是否有气泡出现，如果没有，说明脱气机正常，否则说明该通道脱气机很坏。脱气机的工作原理见下图。

1.3进样器

有手动进样器，自动进样器之分，目前有很多单位都使用自动进样器了，毕竟效率高，劳动强度也降低了。自动进样器的保养时很重要的，尤其是要注意防灰尘和清洁自动进样口，灰尘很容易导致其中的机械臂滑竿不灵活，卡死等。这时就应该清洁，听工程师说，一般不要上什么油，上了油粘了灰尘反而不好，最好是给自动进样器按个门挡灰。自动进样口就好比人的嘴，是要保持干净的，必须定期清洁，毕竟这里的进样品进进出出，难免不脏。

1.4色谱仪的输液泵

这就是色谱仪的心脏，也是色谱仪中最复杂的部件。一般色谱仪的泵分很多种，有高压、低压的；有串联、并联的；有柱塞往复式、柱塞隔膜式等。

并联柱塞泵（能减少流量脉冲）串联柱塞泵（能消除流量脉冲）

一般由于串联式降低脉冲的作用比并联式强，而且单向阀少一副，因此价格便宜，故障发生率低，应用更广泛。

在梯度洗脱中，需要讲到低压和高压混合，两者的区别就是低压混合是先低压混合，再由一个高压输送，而高压混合是用两个高压泵混合。前者气泡的影响很大，需要配置脱气机，后者气泡影响小，不需要脱气机，但费用高。下图是agilent的四元低压梯度系统，使用的就是串联双泵。

高效液相色谱仪用久了，压力就会慢慢高了，一般脱气时超过10bar时，就需要更换脱气阀滤芯，这个操作很多人都会，很简单的。我这里说的是怎样根据滤芯判断有机流动相的纯度，当有机相不纯时，往往会在滤芯上留下杂质，但由于其在有机相中有一定溶解度，因此压力变化很小，当更换为极性较低的流动相时，由于溶解度下降，堵塞滤芯，系统压力就会急剧升高，这时就可以判断有机相纯度差，需要更换。

关于输液泵，还有一个要注意。就是现在有很多泵配有在线洗脱装置，需要不间断用10%异丙醇进行洗脱，这是很重要的。有很多使用者很懒，觉得只有在使用缓冲盐流动相时才配10%异丙醇进行洗脱，其实不是，只要你一开动输液泵，就应该使用wash。这是因为泵内有两个石墨密封圈，与红宝石活塞杆一直在进行摩擦，需要有异丙醇进行润滑和冲洗，异丙醇的试剂级别一般化学纯就够了。

1.5 色谱柱

色谱柱的相关知识最多，理论研究也最充分，在下节说。

1.6 检测器

我这里主要讲流动池的清洗。我遇到过一次流动池脏了，怎么清洗检测都通不过，最后还是拆开来洗，解决问题。不拆开洗，一般用5%硝酸和10%异丙醇交替不通过输液泵和色谱柱进行清洗，直至清洗到检测能通过为止。如果才开，就需要有专门的工具，但清洗也简单一点。

2. 色谱理论知识

高效液相色谱柱有很多种，用得最多的ODS柱。其分离理论，在大学分析课程中都已经很详细的讲解了。我这里讲的是怎样让色谱柱发挥到最大效能。

首先就是了解自己的色谱柱。可以打电话咨询供应商，也可以查阅相关说明书等，但你应该了解这个色谱柱的填料，特点，PH值使用范围等。

其次就是知道一些基本的色谱柱维护知识，比如硅胶柱不要用100%水长时间冲洗，前端封口不紧密的色谱柱不能反冲，使用缓冲盐系统时要逐步过渡，保存色谱柱的流动相要含有一定比例有机相，长期不用时要定期活化柱子等等。

最后就是知道或了解一些常用流动相的性质，最好是身边有一本相关的册子和书籍能供你随时查询。

好了，就将这么多，这里不涉及广告，宣传，完全是与大家交流，请大家支持。

2010-7-20

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分
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dearwlz

第1楼2010/07/20

好样的，新手可以下载看看。。

0

往往外

第2楼2010/07/20

应助达人

并不是所有的高效液相里面都有脱气机吧？
楼主所述的1.5 色谱柱里面讲到的下节？期待您的更新哟~

0

小卢

第3楼2010/07/20

在脱气机和输液泵这两个部分讲的很不错，有很多原来没有好注意到的东西都提到了！
受用匪浅啊！

0

huilinguo126

第4楼2010/07/21

谢谢检测器部分的分享，刚好碰见类似的问题

0

hehu2010

第5楼2010/07/21

一般只有低压泵才需配脱气机，关于色谱柱的知识，很多，我整理了再列出来吧

0

小卢

第6楼2010/07/21

好的，欢迎继续补充！
hehu2010(hehu2010) 发表:一般只有低压泵才需配脱气机，关于色谱柱的知识，很多，我整理了再列出来吧

0

给力芬

第7楼2010/07/21

总结的不错，前两天在仪器信息网上说，吸滤头超声波清洗15分钟，LZ能说下应该怎么操作，好吗？

0

saral

第8楼2010/07/21

新手可以下载看看。。

0

xiaofeng

第9楼2010/07/22

这一篇看的懂，楼主辛苦啦，收藏！

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frh_dj

第10楼2010/07/22

我们过滤头一直是先用30%磷酸超声清洗再用稀硝酸钝化，好象是waters的培训册上的，我个人觉得这样比较好。

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