【求助】HPLC流动相预混合和流动相等度运行保留时间不同，差别较大

应助达人

是高压梯度吗？能不能上一下两测试图对比看一下。如果色谱柱没有问题，那么仪器有没有明显的死体积，用一个平常做的最稳定的样品检测一下，看看仪器有没有异常。脱机除了控制板，数据线和电脑系统，我也想不出还有哪里有问题。

非常感谢你的指点，多谢！回头试试看。依你们的经验，是水和试剂的问题吗？

应助达人

有问题只能一个个排除，如果怀疑水与试剂有问题，那就换一个没有问题的水和试剂在相同条件下检测一次就知道了。

HPLC流动相预混合和流动相等度运行保留时间不同，差别较大
这是正常的，在没有问题的仪器上做，也会出现。
可以检测一下仪器的流量是否正常。

梯度混合时容易产生汽泡,会影响出峰时间!而等度则不然!!

需要注意的是你预混合70%甲醇水溶液的时候应该分别用量筒量取70ml甲醇和30ml水，再混合；如果你量取了70ml甲醇再往上添加水至100ml，由于分子间的相互运动实际的比例可能不足70%

因为你预先混合的流动相跟等梯度的流动相所用的东西不是同一个，我认为这样没有可比性，你可以自己配制一个预先混合的70%甲醇的流动相，做过实验后再比较，这样就能看出是不是你仪器的混合器有问题了，另外一个就是水的问题，原来我就碰到过，水对流动相的影响还是很大的，我上次碰到这个问题的时候，把所有其他的问题都排查了一遍，最后才想到水的问题，希望你不要像我那样，做了很多无用功

流量方面，工程师来检查过，没问题。