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【求助】响应信号逐渐变小

anyizhimin

2010/09/29

液相色谱（LC）

同一个标准品反复进样数针，响应高度逐渐变小。尝试数个不同等度，均有如此现象。调整标准品的溶解液（不同比例不同pH值的乙腈），仍有该现象。

仪器：安捷伦1100
色谱柱：Luna HILIC
流动相：乙酸铵缓冲液与乙腈

排除可能的因素：温度变化：否，已经控制柱温恒定
压力变化：否，压力几乎没有波动
保留时间：无变化，变异小于0.1分钟
流动相变化：否，等度条件，溶剂瓶盖严，有机溶剂均为Merk的HPLC纯，缓冲盐也是HPLC纯，水为MQ水，进样间隔仅为5min
气泡：否，仪器配备脱气泵，在使用前也预脱气过。
溶解液太弱：否，HILIC更像正相柱，有机溶剂比例越高保留越强。且尝试了从50%乙腈到100%乙腈。
缓冲液pH值：否，按理论与待测物的pka相差2。

那么还有什么原因会导致如此的结果？

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有水有渝

第1楼2010/09/30

应助达人

是否溶液不稳定，容易降解？

0

xiaohui9804

第2楼2010/09/30

论证下方法吧，标准品浓度你没说，那你就尝试下不同浓度的，做标准曲线系统考察下方法

0

anyizhimin

第3楼2010/09/30

样品的稳定性没有问题，原来的方法是C18柱的，在进样器放置24h都是稳定的，这个经过方法验证的。我换回原方法就没有这个情况。
而且样品是标准品新配的。

0

老多_小多

第4楼2010/09/30

是否尝试用别的物质测定来验证仪器的稳定性呢？

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teanyt

第5楼2010/09/30

可能是标准的问题，建议楼主做一次标准品的核查

0

ruby70303

第6楼2010/09/30

紫外灯用多久了？

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Brooks

第7楼2010/09/30

如果用C18柱没问题，用HILIC柱就有问题，那就能排除仪器的问题

我以前做过糖，用氨基柱，糖会和氨基柱的键合基团反应。供楼主参考。

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分
该帖子已被版主-〓猪哥哥〓加1积分，加2经验;加分理由:分享奖励

儒雅凤

第8楼2010/10/13

Luna HILIC 介绍

交联二醇提供HILIC条件下极性选择性。对极性化合物强大的保留和选择性，同时还增加了样品处理和提高了质谱灵敏度。
Luna HILIC在硅胶表面保留了一层水富集层。这层水层促进极性化合物迁移至固定相上，增加保留。

RC-C18以多键合硅胶为填料，具有优异的稳定性。独特的单官能团化学键合技术可避免形成复合的C18分子层。均匀的涂层确保了固定相具有高选择性和高效率的分离特点。

这两种柱应该是不同的，楼主的样品有否可能与柱子中的固定相有强吸附，因而引起不易洗脱等现象。

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分
该帖子已被版主-〓猪哥哥〓加1积分，加2经验;加分理由:分享奖励

〓猪哥哥〓

第9楼2010/10/13

问下原来方法和现在方法差异在哪里？
anyizhimin(anyizhimin) 发表:样品的稳定性没有问题，原来的方法是C18柱的，在进样器放置24h都是稳定的，这个经过方法验证的。我换回原方法就没有这个情况。
而且样品是标准品新配的。

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〓猪哥哥〓

第10楼2010/10/13

有这个可能性。但是不知道与原方法的差别在哪里。
ruby70303(RUBY70303) 发表:紫外灯用多久了？

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