维生素是维持生物体正常机能的必不可少的一大类有机物质，虽然机体对这类物质的需求量很小，但却十分重要。其中水溶性维生素与人体的生长发育和健康密切相关，尤以维生素C和B族维生素为重。维生素常被作为营养强化食品的添加因子，广泛存在于谷类、果蔬、肉禽和蛋类等加工食品中，因此，维生素的检测对食品、饮料、医药和饲料领域都有非常重要的意义。
水溶性维生素的测定方法主要包括微生物法、荧光法和高效液相色谱法等。其中微生物法实验周期长，荧光法也费时，且不能同时测定多种维生素。高效液相色谱法样品前处理简单，样品用量少，分离速度快，可同时测定多种水溶性维生素。
1 仪器与试剂
HITACHI L-2000高效液相色谱仪、配L-2400紫外检测器，各种试剂均为色谱纯或分析纯，实验用水为超纯水，维生素对照品均为Spluco标准品。样品为市售维生素片。
2 样品处理
取待测样品数片碾细混匀，精确称量0.1～3g至100mL棕色容量瓶中，测定VC用3%的偏磷酸溶液定容，其它加去离子水至刻度，超声波震荡助溶10min，过滤后取滤液经0.45μm微孔滤膜后进样。以上操作过程均在避光条件下进行。
3 色谱条件
色谱柱： ZORBAX SB-Aq柱(5μm,250×4.6mm)；
流速1.4mL/min；
柱温：40℃；
进样量：20μL；
流动相：A：乙腈，B：1%的三氟乙酸溶液
时间（min） | A（%） | B（%） |
0 | 0 | 100 |
6 | 3 | 97 |
8 | 15 | 85 |
15 15.1 | 20 0 | 80 100 |
4 标准溶液的配制
准确称取维生素C标准品0.05000g，用3%偏磷酸溶液定容至50mL，此时溶液浓度当于1mg/mL，再配成0～100μg/mL标准系列；准确称取维生素B1,B2标准品0.02500g，用0.1mol/L的盐酸分别定容至250mL，此时溶液浓度当于100μg/mL，再配成0～40μg/mL标准系列；准确称取维生素B6，烟酰胺标准品0.02000g用0.1mol/L的盐酸定容至100 mL，此时溶液浓度当于200μg/mL ，再配成0～40μg/mL标准系列。
5 结果与讨论
5.1检测波长的选择
根据维生素标准在200～400nm吸收光谱的扫描结果，选择VC的测定波长为242nm，VB1、VB2为267nm,VB6为290nm，烟酰胺为261nm。
5.2流动相的选择
本研究采用乙腈/三氟乙酸溶液体系，在此基础上，试验了辛烷磺酸钠等离子对试剂的分离效果，但不理想，离子对试剂价格较高，对色谱柱的柱效和泵损害较大，且平衡时间和冲洗时间较长。故综合考虑采用流动相梯度洗脱。
5.3样品测定
在选定色谱条件下，测定了含多种维生素的多维片、多种维生素B片、多种维生素软胶囊、多维营养片的含量，结果见表1。样品和标准色谱图见图1和图2。
表1样品测定结果（%）
样品名称 | VC | 烟酰胺 | VB1 | VB2 | VB6 |
多维片 | 6.48 | 1.13 | 0.09 | 0.09 | 0.12 |
多种维生素B片 | — | 2.08 | 0.31 | 0.18 | 0.23 |
多种维生素软胶囊 | 7.38 | 0.89 | 0.10 | 0.11 | 0.13 |
多维营养片 | 7.45 | — | 1.14 | 0.57 | 0.21 |
图1多维片的色谱图
1—VC,2—VB1,3—烟酰胺,4—VB6,5—VB2
图2维生素标准品的色谱图
1—VB1，2—烟酰胺，3—VB6，4—VB2，5—VC
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