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【资料】高速逆流色谱介绍---pH-区带精制逆流色谱

jia

2010/10/27

pH-区带精制逆流色谱(pH-Zone-Refining Countercurrent Chromatography)是Ito等1994年在应用HSCCC分离纯化溴乙酰三碘甲腺氨酸（BrAcT₃）时发现的，它是在普通的高速逆流色谱仪器的基础上，通过对分离样品所用的溶剂系统的组成的调配，采用化学的手段，使样品组分的色谱分离过程增添了按pH区带聚集的特征，同时，使组分的洗脱过程表现为类似置换（顶替）色谱（Displacement Chromatography）的洗脱过程，因此，它的色谱图不再是高斯分布的色谱峰形系列，而成为按pH值的大小排列的边界陡削的矩形区带系列，其结果是能把相同容积的逆流色谱仪器的分离制备量提高数倍乃至十倍。
pH-区带精制逆流色谱的分离原理，以分离酸性物质为例，在分离柱内，有机相固定相占据上半部分的空间，水溶性流动相占据下半部分空间。基于其非线性等温线的作用，保留酸形成了一个陡峭的缓行边界。该边界在柱中移动的速度比流动相慢，当酸性被分离物出现在流动相中时，由于低的pH值而形成了疏水的质子化形式，随后，它进入了有机相固定相。随着陡峭保留边界的前移，分离物将暴露在一个较高的pH的位置，这时，分离物会失去质子并且转移到水溶性的下相中。在水溶性流动相中，被分离物快速迁移穿过陡峭的保留边界，进而重复上述的循环。因此，被分离物总是被限制在陡峭的保留边界周围的狭窄区域，并且伴随着陡峭的保留酸边界洗脱成一个尖峰。被分离物的流出，按区带的pH值大小密排成顺序，而每一个区带的pH值则是由被分离物的电离常数pKb 值及亲水性所决定，可以表达为以下关系式：

pHzone= pKa+log[log[Kd/K-1]],

式中，Kd为分配率 (反映被分离物的亲水性的强弱)；K为保留酸或被分离物的分配系数。

保留酸 (或碱)的作用是在溶质区的前面把溶质从流动相中转移到固定相中，洗脱碱(或酸) 的作用是在溶质区的后面把溶质从固定相中转移到流动相中。当存在多种较大量的溶质时，具有最大pKb 值和最强亲水性的溶质会首先流出分离管柱。依此类推，不同溶质的区带按其pH值的升高 (或降低)的顺序依次排列，从而达到分离的目的。采用这一技术时，常用的溶剂系统有：三氟乙酸(TFA)和氨水(主要用于分离有机酸性物质)，三乙胺和盐酸(用于分离有机碱性物质)等。

与普通HSCCC相比，其突出特点是在溶剂系统的固定相中加入保留酸(或碱)，同时在流动相中加入洗脱碱(或酸)；不同物质洗脱出来时伴随着pH值的突变。采用该技术能得到最小重叠的矩形峰色谱结果，同时，杂质会被聚集在目标组分峰的两侧。该技术已被成功地应用于氨基酸衍生物、肽衍生物、氧杂蒽染料、立体异构体、天然产物的生物碱及有机酸化合物的分离中。pH-区带精制逆流色谱不仅在保持高速逆流色谱技术无固态支持体干扰和分配分离效率高等优点的基础上，而且扩充了更大制备量的分离能力（是普通HSCCC的十倍之多）。

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头像更新中，请稍候…

第1楼2010/10/28

其实说起来，05年以前，色谱A还能接受HSCCC人文章

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jia

第2楼2010/10/28

JCA的影响因子已经超过4了，影响因子上升很快，要想继续发HSCCC类的文章，必须跟新技术新思路连接起来，以联用思路投稿。单纯的CCC文章别说JCA，就是JCB，SPT等也很难投中。
环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:其实说起来，05年以前，色谱A还能接受HSCCC人文章

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jia

第3楼2010/10/28

说实话，我们实验室在逆流方面在04-08年有10篇JCA,但自08年至今也没有突破JCA，我们现在考虑的就是新思路的串联应用及新型机理研究以冲刺JCA。
环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:其实说起来，05年以前，色谱A还能接受HSCCC人文章

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头像更新中，请稍候…

第4楼2010/10/28

感觉连用也不太明朗啊，这个技术似乎落后了
可以开专贴谈谈啊
jia(jia) 发表:说实话，我们实验室在逆流方面在04-08年有10篇JCA,但自08年至今也没有突破JCA，我们现在考虑的就是新思路的串联应用及新型机理研究以冲刺JCA。

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