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【资料】有关HPLC几个问题

青林

2010/11/13

液相色谱（LC）

有关HPLC几个问题：

1.移動相的峰不知道是不是都是出現在4分鐘或之前?
一般都是在5分钟以前，但会有例外。

2.條件一樣的話不同儀器會不會保留時間就有所改變?怎麼照文獻做出來的差很多
不同设备会有差别，估计会有1-2分钟，色譜柱不同也可能。

3.有時候用一樣的條件但是圖形的基線會一直往上移或往下移(斜斜的)是什麼因素造成的?要怎麼改善?
那是你的色谱柱接得不太好造成的

4.用標準品先做出檢量線再做自己的樣品就可以定量了嗎?這是什麼原理阿?
看看外标法

5.因為一些原因我HPLC樣品進去的LOOP比樣品一針的量還要大會不會影響到保留時間阿?
1)不一定，但绝大多数是。要根据色谱柱填料的极性和流相溶剂的极性大小来确定。绝大多数分析的要求流相不影响组分的分析

2)条件一样色谱一样，但仪器不同就是条件不一样了啊，条件不可能绝对一样的，所以保留时间也不可能绝对一样啊。文献里的条件和实测的条件有很大差距的，结果当然也有很大差别了。
3)漏液或静电影响，或溶剂的pH没调好，流相脱气没彻底....因素很多。
4)外标法是可以的，作好标准曲线就作好浓度和响应值的回归方程，一般用y=ax+b表示，用y表示响应值（纵坐标），x表示浓度（横坐标），b是截距，a是斜率。原理是最小二乘法计算原理吧，把响应值看成随浓度变化的参数。求得标准曲线后，再通过读得的样品响应值在坐标曲线中找到对应的浓度。

5)一般不会，绝对会有，但不显著，这样进样不合规范，建议买大点的进样针或买小点的定量环

6)定性价值，三维加入了时间点上的光谱图，能根据光谱信息加强组分的确认，可以看出峰的纯度。DPDA的定量不会比紫外检测器差。

看你选用什么样的色谱柱，极性还是中等极性柱。
单选纯有机相的溶剂在分析极性物质是不科学的，乙腈水为流动相比较好点，作为离子给予体比甲醇（离子接受体）会好点，甲醇水体系会有不同的黏度变化，作为流动相体系在很多情况下不如乙腈水的。
DAD的三維圖峰純度看峰顶的地方的圆滑度和在峰的顶点位置的最大吸收波长是不是与待测组分的最大吸收波长相同
一般保留时间会有很小的差异，我做到过无差异
6.我的DETECTOR是DAD有三維的圖這有啥參考價值嗎?用DAD定量會比較差嗎?
DAD的很好，三D的能做峰纯度检测。精度会差一点点，没影响的

BB峰即分离达到基线的峰，其积分计算峰面积准确，BV峰即分离未到基线，从峰谷到基线积分其面积值偏低。

BB和BV是计算峰的起止点不同切割的说法，用一楼的回答补充应该就是基线相切和基线、峰谷相切；
平时我们关注的不是很多，感觉主要还是取决于峰形的好坏，和分离度的高低，理论塔板数的大小，具体峰是哪种，相对于面积百分比或者外标法，对结果影响应该不会很大。但是是一种参考和借鉴。

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〓猪哥哥〓

第1楼2010/11/25

感觉主要还是取决于峰形的好坏，和分离度的高低，理论塔板数的大小，具体峰是哪种，相对于面积百分比或者外标法，对结果影响应该不会很大。但是是一种参考和借鉴。

很少会关注这个参数。主要是分离度，对称性

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