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【求助】帮忙分析下这张色谱图

液相色谱(LC)

  • 请各位帮我分析下这两张图:
    Agilent1200,1ml/min,230nm,样品是柱层析之后的组分
    流动相:A—水 B—甲醇
    0min 15%A 85%B
    8min 15%A 85%B
    8.01min 0%A 100%B
    13min 0%A 100%B
    15min 100%A 0%B

    图一:原始上样


    图二:三倍上样

    而现在我知道,我想要的物质是在后面这个主峰里边。
    问题是:
    1、后面这个大峰通过改变流动可以得到很好的分离吗?如果是,要如何改变?
    2、为什么这个基线会如此的不平稳呢?即使加大量,这个图谱还是很相似的,难道是里边含有太多的含量相对较少的杂质?如果是,这些杂质是如何引进的?
    3、就各位经验得来看,用于HPLC的样品,其前处理有什么需要注意的地方?比如,装样品的瓶子要干净的什么程度?每次需要酸啊、碱啊重复洗吗?
    4、这个图还有什么需要注意的地方吗?或者说不正常的地方吗?
    谢谢各位的指导了。
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  • zhz6688

    第1楼2010/11/19

    应助达人

    感觉溶液不纯,或是柱子没分开.

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  • 21kgtan

    第2楼2010/11/19

    由方法看图,这图很正常
    你的柱子应该是4.6*250mm的吧,柱体积4ml左右,所以组分从4分钟开始被冲出来。你起始浓度是85%甲醇,如果你想知道是不是杂质过多,可以调低起始浓度.但是如果不考虑前面,只想要后面的物质分离,我建议你在8min那里微调,给一个缓冲时间或者浓度,不要一下子8.01min就由85%升到100%

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  • 冷冷的冰雨

    第3楼2010/11/19

    换根柱子试试

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  • 有水有渝

    第4楼2010/11/19

    应助达人

    先进一个对照品看看色谱

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  • lytion

    第5楼2010/11/19

    1.就算该条件分离出来时间也需要太多了,而且也会展宽严重
    2.走梯度基线是不可能平的(除非用特殊梯度溶剂),看怎么走梯度,往上往下飘都是正常的
    3.干净就行了,又不接质谱

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  • geebzbz

    第6楼2010/11/19

    确实是那类型的柱子,那么你们对于梯度洗脱,一般一个梯度会多长时间?或者说,我还想知道一般一次进样跑多长时间啊?

    21kgtan(21kgtan) 发表:由方法看图,这图很正常
    你的柱子应该是4.6*250mm的吧,柱体积4ml左右,所以组分从4分钟开始被冲出来。你起始浓度是85%甲醇,如果你想知道是不是杂质过多,可以调低起始浓度.但是如果不考虑前面,只想要后面的物质分离,我建议你在8min那里微调,给一个缓冲时间或者浓度,不要一下子8.01min就由85%升到100%

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  • geebzbz

    第7楼2010/11/19

    嗯,那你觉得我该怎样改变流动相以缩短时间?
    还有,我说的基线不平,主要是指5-6min、8-11min这些时间里边为什么不平啊?虽然这个过程是梯度,但在一小部分时间里是流动相是恒定的啊,所以基线应该是平的才对啊,为什么呢?
    谢谢!

    lytion(lytion) 发表:1.就算该条件分离出来时间也需要太多了,而且也会展宽严重
    2.走梯度基线是不可能平的(除非用特殊梯度溶剂),看怎么走梯度,往上往下飘都是正常的
    3.干净就行了,又不接质谱

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  • 〓猪哥哥〓

    第8楼2010/11/19

    这个是安捷伦的图谱吧。
    基线跑的太高了。说实话,非常难看,找不到需要的峰。
    为什么起始甲醇那么高,基本上很多东西全部都一起出来,成分之间无分离度可言。

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  • 〓猪哥哥〓

    第9楼2010/11/19

    起始的85%,很有可能样品在8min内出峰。
    用对照品做一个对照

    21kgtan(21kgtan) 发表:由方法看图,这图很正常
    你的柱子应该是4.6*250mm的吧,柱体积4ml左右,所以组分从4分钟开始被冲出来。你起始浓度是85%甲醇,如果你想知道是不是杂质过多,可以调低起始浓度.但是如果不考虑前面,只想要后面的物质分离,我建议你在8min那里微调,给一个缓冲时间或者浓度,不要一下子8.01min就由85%升到100%

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  • geebzbz

    第10楼2010/11/20

    对,这是安捷伦做的。之所以选择85%甲醇,是因为最开始的时候做过0%-100%的梯度,在前面都没有东西,后来试了几次之后,发现其实在85%差不多就可以了。我的样品是乙酸乙酯提取物,然后还过了柱层析的,所以,极性的话,应该相对比较小了。
    基线太高的话,要怎么处理啊?会不会是因为选择参比波长没有选对啊,或者检测器的狭缝啊,或者其他什么的没有设置正确?并且前4min左右,由于是没有样品的的,所以基线很低很平,这更让我矛盾了。多谢指教,多谢指教!

    〓猪哥哥〓(03yx2) 发表:这个是安捷伦的图谱吧。
    基线跑的太高了。说实话,非常难看,找不到需要的峰。
    为什么起始甲醇那么高,基本上很多东西全部都一起出来,成分之间无分离度可言。

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