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【求助】吸光值为残留氨基酸量。每次测定的结果都非常奇怪?
feixiang3152
2010/11/29
私聊
化学药检测
大家好:
我最近在做蛋白质修饰率的测定。可是我每次做的结果都是未修饰和修饰过的在335nm处吸光值都非常低,大概在0.003或0.004。我采用的是TNBS法,具体如下:
1mL蛋白液(修饰蛋白和未修饰蛋白)+1mL4%碳酸氢钠+1mL0.1%TNBS,混匀后40°反应2h,再加入1mL10%SDS和0.5mL1N盐酸,在335nm处读取吸光值。修饰后蛋白质的吸光值/修饰前蛋白质的吸光值为残留氨基酸量。每次测定的结果都非常奇怪,那么低,我感觉不可信,根据原理应该是修饰后的吸光值小于修饰前的吸光值才合理啊。我也不知道吸光值应该在怎样的范围内正常?我们实验室没有人做过,请大家指点一下吧!哪里有问题呢?谢谢
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私聊
shandaminmin
第1楼
2010/11/30
修饰过程不恰当吧??
0
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