【求助】做三聚氰胺，奇怪的事情

应助达人

加了离子对了吗？热水冲了这么久可能是柱子失效了，把柱子中的缓冲盐清洗干净后，低流速下甲醇冲洗过夜，第二天再试试看。

当然加了啊，辛烷磺酸钠，加了

安捷伦工程师说温水冲这么长时间可以的，但是冲洗的时候没有先把柱子取下来可能不好，另外c18柱子没有冲洗，为什么时间也减少了呢？
我觉得是把除过柱子的管路冲干净了
我照你的方法，低流速下甲醇冲洗过夜，是甲醇冲洗一整晚么？还是柱子充满甲醇一晚？

温纯水冲洗柱子那么长时间，应该是柱效下降了，用甲醇低流速冲一晚上应该可以恢复一些。

看了上面几位发言，应该柱子没问题的，是离子对试剂的问题。把柱温调高（40-50度）用甲醇长时间彻底冲洗色谱柱，然后再回到分析条件，用你的流动相从新平衡色谱柱，进样分析就OK了。原理：离子对试剂（表面活性剂）在色谱柱中凝固了！

谢谢解答，还有几个问题想请教：
1.离子对试剂也能凝固？以前知道磷酸盐缓冲溶液可以结晶析出的
2.“原理：离子对试剂（表面活性剂）在色谱柱中凝固了”，您指的凝固是指：原先出峰时间较长的原因是因为离子对试剂（表面活性剂）在色谱柱中凝固么？那我用温水冲4h,原先的凝固被冲掉了，是这样的么？
3.为什么“把柱温调高（40-50度）用甲醇长时间彻底冲洗色谱柱”？是因为管路堵塞么？原理是什么？

1)“凝固”这是我的解释
2）反相色谱柱填料的表面布满了C18侧链，当流动相中含有庚烷磺酸钠时，这些分子就被表面吸附，形成一种表面为阴离子的结构，使得溶液中的阳离子可以与其形成离子对而被保留。在温度较低或这些成分含量较高的环境下，这些离子对有可能会定向地排列起来，使得填料表面形成一种有规律的双分子层，不再是粒子对，这样再有三聚氰胺分子进入时就不再会形成离子对而被很快洗出。
3）加热冲洗可以把这些凝固了的离子对洗出，恢复色谱柱原来的表面，原来的柱并没有被堵塞。

感觉这种飘移正常，因为离子对试剂的存在，建议你重新配一次流动相做对比，再做考虑！

用离子对出现这样的情况很正常。
色谱柱没问题。建议重新配制新的流动相试一下，虽然你说配比没问题。
还有就是是否平衡充分了，你可以多打几针标品，看一下RT的变化情况。