细菌总数在二次供水检测中准确度的控制
徐霞君
(深圳市水质检测中心)
去年冬天
第1楼2011/02/22
一般从取样到检测不要超过2h，否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h。而一些采样队为了追求单方面效率，往往从上午8、9点开始取样，到下午5点左右才把水样送到实验室检测，而且没有冷藏设备保准，这一步对细菌总数的准确度控制往往是最致命的因素。
2 培养基配备中的规范
培养基一般都用合成培养基,但在配制、灭菌和保存中须严格控制及规范。
2.1 在配制中，须煮沸，经多层纱布过滤。否则，培养基中的一些细小杂质会影响细菌计数。
2.2 在灭菌中，一般都以121℃灭菌15min。但灭菌完后，培养基须做灭菌是否完全检验，即把培养基置于37℃恒温培养箱中恒温培养24h后，证明它无菌方可使用。
2.3 灭菌后的培养基须标明培养基名称、配制人及配制时间。包上牛皮纸于4~10℃冰箱中保存，避免阳光和杂菌污染及液体蒸发，保存期为一个月。
3 实验室中具体操作的规范
一进入无菌室须进行无菌操作,须穿专用白色工作衣、换专用鞋帽、用消毒酒精揩手和操作台等。在具体操作中，还有下面一些操作需规范。
3.1 水样瓶口，在取1 ml水样先，须经适当火焰灭菌。避免移液管碰到及细菌进入。
3.2 由于细菌受固体培养基表面或深层的限制，按GB5750-85标准细菌培养 皿的直径须为9cm，倾注量约15ml，培养基温度须控制在45℃左右，温度太高会把细菌烫死，而温度太低培养基会凝结成块，影响细菌计数。
3.3 倾注培养基时，勿将皿盖打开，以免空气中尘埃及细菌进入。倾注培养基后，须立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。如混匀不均，有时会导致菌落在一区域内密集，很难计数。
3.4 每次检测，须另用一个平皿做平行接种，即同一个样的同一个稀释度须做两个平皿。有的技术人员往住忽略这一点。
3.5 每次检测中，另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照，一般空白细菌数为0，但也有可能为1或2的，（空白平皿细菌数不为0的，说明有污染，按理应重做水样，但同一水样作再现性测定不是件容易的事，重做水样也无意义。）这时计水样的细菌菌落数时须减去空白细菌菌落数。
去年冬天
第2楼2011/02/22
4 培养条件的规范
培养后，立即进行平皿菌落计数。培养一般在37℃恒温培养箱中培养，但培养时间须为24±1h，以保准每 一个活细胞长出菌落。因细菌生长所需的一定的湿度，可在培养箱中放置一瓶水，以保准细菌长足。
5 计数中的规范
一般计数为同一个水样两个平皿的平均菌落数。如有的平皿的细菌菌落数明显不合理，如有较大状菌落生长时，则弃去不用，直接计另一平皿的细菌菌落数。作平菌落计数时，可用菌落计数器或放大镜检查，以防遗漏,对那些看来相似，距离相近却不相触的菌落，只要它们之间的距离不小于最小菌落数的直径，便应一一予以计数。那些紧密接触而外观相异的菌落也应该一一予以计数。
6 后处理的规范
带菌培养基不能直接弃去，一则带菌培养基会污染环境；二则培养皿不干净会影响测定结果。
培养细菌的玻璃器皿，应先经高压蒸汽灭菌，或泡在水中煮沸10min，趁热倒出培养基，用热肥皂水或洗涤剂刷洗残渣，再用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1~2次，沥干。
7、平衡样的规范
为了监测这一系列步骤是否规范，我们中心规定每10个二次供水水样须做3
个平衡样。即采样时每10个点中有3个点须取同样两瓶水样，并进行盲样编号送检测室进行检测，检测室出结果后再核对平衡样是否平衡。
结语
二次供水水样中细菌总数的测定，受各种因素的影响，但又不象其它化学指标有考核样，因此，只能规范各个检测步骤中的各个细节，才能使水样细菌总数结果的准确度得以控制。
参考文献
1， 诸葛健，王正祥编著·《工业微生物实验技术手册》·北京：中国轻工业出版社，1994,6
2， 国家环境保护总局/《水和废水监测分析方法》编委会编·《水和废水监测分析方法》-第四版·北京：中国环境科学出出版社，2003,2
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