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【分享】ELISA方法快速检测肉制品中的沙门氏菌

去年冬天

2011/05/17

食品毒素/微生物检测

一、实验目的

掌握ELISA方法快速检测肉及肉制品中的沙门氏菌的具体方法及操作步骤。

二、实验原理

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的固相酶免疫测定方法,是在放射免疫分析理论的基础上发展起来的一种非放射性标记免疫技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好,所用试剂稳定、易保存,试验操作简便,结果判断客观等特点常用的ELISA测定方法有:根据检测目的和操作步骤不同,ELISA有3种基本方法。(1)双抗体(原)夹心法 (2)间接法(3)竞争法。其中竞争法由于具有反应重复性与完成性好的特点,它是目前使用较广泛的测定方法。

三、实验材料

1．包被缓冲液：碳酸盐缓冲液（pH9.6 , 0.1M） Na2CO3.10H2O 11.45g NaHCO3 5.04g NaN3 0.2g 蒸馏水加至1000mL

2．稀释液： PBS(Ph7.4, 0.15M ) 0.2M Na2HPO4 40.5 mL 0.2M NaH2PO4 mL NaCl 8.2g

3．Tween 20 0.5 mL 蒸馏水加至1000mL

4．洗涤液：NaCl -Tween NaCl 8.5g Tween 20 0.5 mL蒸馏水加至1000mL

5．底物溶液：磷酸盐-柠檬酸缓冲液（pH5.0） 0.1M柠檬酸 24.3 mL 0.2M磷酸氢二钠25.7mL蒸馏水加至50mL 邻苯二胺 40 mg，溶解后避光保存。临用前加入30% H2O2 0.15 mL

6．封闭液：0.2% BSA溶液

7．沙门氏菌血清

8．辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体

9．终止剂：2M 硫酸

10．ELISA板

11．酶标检测仪

12．移液枪

13．人工污染沙门氏菌的香肠制品一份。

四、实验步骤

(1)样品前增菌18-24h.

(2)样品包被:取样品100μｌ/孔包被酶联板4℃过夜，洗板3次。

(3)封闭:BSA 200μｌ/孔,37℃孵育1ｈ，洗板3次。

(4)加入一抗100μｌ/孔，洗板3次。

(5)加入酶标二抗100μｌ/孔37℃孵育1ｈ，洗板3次。

(6)加入底物，37℃孵育30ｍｉｎ。

(7)加入终止剂。

(8)读取结果。

五、实验结果

通过酶标检测仪读数判定检测结果。

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分
该帖子已被版主-去年冬天加2积分，加2经验;加分理由:感谢分享！欢迎常来微生物版块～～

去年冬天

第4楼2012/02/17

这是内部标准操作方法
故乡的一片云(zxf19810709) 发表:这是实验室方法？还是国标、行标？能作为出具报告的依据吗？

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