仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
食品检测
>
食品毒素/微生物检测
>
帖子详情
【分享】PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌
去年冬天
2011/05/17
私聊
食品毒素/微生物检测
一、实验目的
掌握PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌具体方法及操作步骤。
二、实验原理
聚合酶链反应(polymerase chain reaction )简称PCR,是一种体外酶促合成反应,扩增特定DNA片断的方法。该技术于1985年由美国的KaryMullis等人首创并由美国GETUS公司开发。其原理是:在存在DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液(Mg2+)的反应体系中,在热稳定DNA聚合酶的催化下,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增。这种扩增是通过模板DNA、引物之间的变性、退火(复性)、延伸等三步反应为一个周期,循环进行,使目标DNA片段得以扩增。由于每一周期产生的DNA片断均能成为下一次循环的模板,故PCR产物以指数形式增加,从而实现信号的放大。
本实验以金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶为靶基因进行检测。
三、实验材料
1.菌种:Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌)-26003-21
2.乳制品:全脂乳、脱脂乳和奶酪均购自当地超市。
3.培养基:营养肉汤培养基
4.化学试剂:10xPCR buffer、dNTPs、TaKaRa Taq、DNA Marker DL2000,
5.引物: 正向引物:GCGATTGATGGTGATACGGTT
反向引物:AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC
6.实验仪器:PCR仪、DXY-33A型电泳仪、UVIpro凝胶成像系统
四、实验步骤
1.将已人工污染的乳品25ml接入225ml营养肉汤培养基中,37℃振荡培养过夜
2.取1ml培养液于1.5ml离心管中,11000rpm,离心1分钟,弃去上清液
3.用灭菌的纯水洗涤菌体沉淀两次,再用100ul灭菌纯水溶解沉淀物
4.将菌悬液于沸水浴中煮沸10分钟,11000rpm,离心1分钟,取上清液,备用
5.PCR反应体系:总反应体系50ul。包括5ul 10XPCR buffer ,4ul dNTPs混合物,0.5ul 40umol正向引物,0.5ul40umol反向引物,0.25ul(5U/ul)Taq酶,模板2ul,水37.75ul。
6.PCR扩增程序:PCR反应采用冷启动。94℃预变性4分钟,再按94℃1分钟-52℃0.5分钟-72℃1.5分钟进行35个循环,最后72℃延伸3.5分钟。
7.电泳检测:取5ul PCR产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳,利用凝胶成像系统观察结果并成像。
分
该帖子已被
版主-故乡的一片云
加2积分,加2经验;加分理由:感谢分享
相关话题
1
将单增李斯特氏菌纳入速冻面米生制品标准中的必要性
2
看不见的食品加工微生物污染 食品安全“微”机待解
3
霉菌酵母计数的实验室操作规程
4
CNAS认可实验室标准菌株管理作业指导书
5
猪肉制品中9种亚硝胺的检测条件
+关注
私聊
无机麦地
第1楼
2011/05/31
乳品中金黄色葡萄球菌容易生长么?
0
发表回复
近期热榜
一句话说说参加原创大赛对您的影响和帮助
油罐混装,这样的食用油你还敢吃吗?
色谱耗材品限时大促,火热进行中!
色谱耗材品限时大促,火热进行中!
热门活动
“食”字路口不容走错!混装油事件何去何从?
罐车运输食用油乱象:如何护航食用油安全?
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】大肠杆菌的原始记录表
2010/10/18
黄曲霉毒素检测分析步骤
分享
2012/05/30
【求助】请问车间中用什么消毒剂比较好呢?浓度又是多少?
2011/03/05
关于环境、公共卫生第三方微生物检测你们的经验有哪些?
咨询
2016/09/09
商业无菌你知道的有多少
讨论
2014/06/06
蜜饯产品致病菌的检测
讨论
2016/05/20
塑料包装容器的微生物检测
求助
2019/09/23
【分享】我这里有两个微生物教程,也不知大家有没有用
2010/07/06
【我们不一YOUNG】分享一则食品生产过程中的微生物控制验证计划
分享
2024/07/09
苯并芘5009.27试样空白本底问题
原创
2024/07/09
食品微生物检测仪有哪些用途
分享
2024/07/05
atp荧光检测仪使用范围
资料
2024/07/04
为什么“千级、万级标准”是一个标准
求助
2024/07/02
急
已应助
2024/06/29
真菌毒素检测仪检定规程介绍
分享
2024/06/20
袋装酱腌菜灭菌办法
已应助
2024/06/14
‘有奖问答’对错题’:用抽样方案(30,0)对产品批进行连续验收,当批不合格品率为1%时,方案的接收概率为73.97%,则平均检出质量为( )。
讨论
2024/07/05
关于发布CNAS-CL01-G001:2024《检测和校准实验室能力认可准则的应用要求》及其过渡政策的通知
分享
2024/07/04
顶空HS-20如何实现不进样仅记录基线
求助
2024/07/09
‘有奖问答’对错题’:OC曲线可以用来( )。
讨论
2024/07/10
17657-2013 1m3甲醛气候箱法问题
求助
2024/07/10
CNAS:CL01-G001变更
求助
2024/07/05
多人主检的报告,检测审核应该怎么签字
求助
2024/07/05
安捷伦定性软件得色谱图
求助
2024/07/10
【分享】ELISA方法快速检测肉制品中的沙门氏菌
2011/05/17
【分享】分光光度技术的定性和定量方法
2011/05/17
【讨论】解析致命食物(六)---新鲜黄花菜
2011/05/17
【讨论】实验室的试剂采购心得征集
2011/05/17
【资料】光谱分析(分光光度技术)
2011/05/17
【讨论】西瓜变炸弹非膨大剂所为?另有起因??
2011/05/17
【分享】纺织标签议案达成共识
2011/05/17
【已应助】文献求助 2011
2011/05/17
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...