Introduction
黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环(A环和B环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物,其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。黄酮类小部分以游离态(苷元)的形式存在,多数与糖结合成苷。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物,它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方起着重要的作用。
本实验研究对象为某中药中一个黄酮类化合物的代谢,本次发表的为代谢产物某流分的定性分析,该流分含有3个代谢产物,我们用Ultimate XB-C18柱和国外某名牌色谱柱对该流分进行了定性分析比较。
1.Chemical and reagents
甲醇(色谱纯,天津大茂),水(哇哈哈纯净水,杭州),三氟乙酸(TFA, Dikma, USA),其它试剂均为分析纯。
2.HPLC analysis of an unknown sample
Waters 高效液相色谱系统,由Waters Model 600 controller液相色谱,Millennium 32 工作站,Model Delta 600 泵,以及Waters 996 DAD检测器组成。
色谱柱:Ultimate XB-C18柱(5μm, 4.6x250mm)和国外某品牌色谱柱(5μm, 4.6x250mm)(用column X表示,投入使用约半年)
流动相:A通道:甲醇,B通道:水(0.05%TFA)=(45:55, v/v)或A通道:甲醇,B通道:水(0.05%TFA)=(40:60, v/v)
流 速:0.6mL/min
柱 温:35℃
检测波长:190-400nm扫描
进样量:20μL
3.Sample preparation
因为涉及保密内容,此部分略去。
4.Results and discussion
Fig.1 Chromatogram of sample solution analyzed by column X
Fig.2 Chromatogram of sample solution analyzed by Ultimate XB-C18 column
Fig.3 Chromatogram of sample solution analyzed by column X(Fig.1的局部放大图)
Fig.4 Chromatogram of sample solution analyzed by Ultimate XB-C18 column(Fig.2的局部放大图)
Fig.5 Chromatogram of sample solution analyzed by Ultimate XB-C18 column(流动相比例降低后)
从图1和图2比较结果可以看出,该样品共含有3种黄酮类成分,DAD检测器给出其最大紫外吸收~270nm,~310nm,从紫外吸收还可以看出,这3种成分结构相似,其保留时间也很近。我们可以看出Ultimate XB-C18柱表现出了更好的分离度,而且展现了更好的峰形。
图3和图4是图1和图2的局部放大图,可以观察到色谱峰的保留时间,图5是将流动相比例降低后用Ultimate XB-C18柱再次分析的结果,虽然没有完全达到基线分离,但结果也是不错的。
该实验只是对代谢产物某流分中的3种黄酮类化合物进行定性分析,没有进行其它条件的考察,比如流动相加不同的酸,加酸的量(pH),以及在乙腈水系统下进行考察,这些将在后续实验中补充。
5.Conclusions
我们通过一个简单的定性实验,即中药某成分代谢产物的分析,比较了2种色谱柱对该流分中3种黄酮类化合物分离能力的研究,结果显示Ultimate XB-C18柱丝毫不落下风,反而表现出了神勇的分离能力。在未来的实验中,Ultimate色谱柱会一直伴随该项目的研究,我们会有更加精彩的结果发表出来,供大家分析讨论。
幽灵龙猫
第6楼2011/05/18
这是比较老的一台仪器了,可能是老板想保护它,可以用更多年吧 呵呵
目前试用的柱子在使用过程中有什么诀窍呢,首先就是流动相一定要现配现用,我发表的“流动相不静心准备的后果”中使用的色谱柱就是试用Ultimate XB-C18,当时一身冷汗啊,幸亏本柱一切正常,其次就是每次样品要滤好,不要吝惜滤膜,再就是每次做完好好冲柱子,我一般都冲40min以上,即使再着急。