去年冬天
第1楼2011/05/20
2.物体表面的微生物学监测
(1)采样时间:消毒处理后4 h内采样。
(2)采样面积:被采表面<100 cm2, 取全部表面;被采表面≥100 cm2,取100 cm2。
(3)采样方法:用5cm×5cm的标准灭菌规格板,放在被检物体表面,用浸有灭菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返各涂抹5次,并随之转动棉拭子,连续采样式1~4个规格板面积,剪去手接触部分,将棉拭子入装10ml采样液的试管内送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
(4)细菌菌落总数检查:1ml采样液放入灭菌平皿内,用普通营养琼脂作倾注培养,放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。
物体表面细菌菌落总数(cfu/ cm2)= 平板上菌落数×采样液稀释倍数
采样面积(cm2)
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第2楼2011/05/20
3.空气的微生物学监测
(1)采样时间:选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
(2)采样高度:与地面垂直高度80~150 cm。
(3)布点方法:室内面积≤30 m2,设一条对角线上取3点,即中心一点、两端各距墙1m处取一点;室内面积>30 m2,设东、西、南、北、中5点,其中东、西、南、北点均距墙1m。
(4)采样方法:用90mm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5~30 min后送检培养。
(5)细菌菌落总数检查:将平板置37℃温箱内培养24 h计数菌落。
空气细菌菌落总数(cfu/ m3)= 50000NAT
式中:A—平板面积(cm2)
T—平板暴露时间(min)
N—平均菌落数(cfu/平板)
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第3楼2011/05/20
4. 使用中消毒剂和无菌器械保存液的微生物学监测
(1)采样时间: 采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。
(2)采样量及方法:在无菌条件下,用无菌吸管吸取1ml被检样液,加入到9ml稀释液中混匀。醇类和酚类消毒剂用普通营养肉汤作稀释液。含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒液需在检验地带网肉汤内加入0.1%硫代硫酸钠作稀释液。季铵盐类消毒液需在肉汤中加入3% Tween80和0.3%卵磷脂作稀释液。含有表面活性剂的各种复方消毒剂需在肉汤中加入3%Tween 80作稀释液。常用消毒剂的中和剂见表6-3-2。
(3)细菌菌落总数检查:分别取1ml采样液放入2只灭菌平皿内,用普通营养琼脂作倾注培养,将其中一只平板置20℃培养7d,观察真菌生长情况;另一平板放37℃温箱内培养72 h计数菌落。平板上有菌生长,证明被检样液有残存活菌,若每个平板菌落数在10个以下,仍可用于消毒处理(但不能用于灭菌);若每个平板菌落数超过10个,说明每毫升被检样液含菌量已超过100个,不宜再用。
(4)判断标准:使用中消毒剂,细菌菌落总数≤100 cfu/ ml,病原微生物不得检出;无菌器械保存液必须无菌。
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第4楼2011/05/20
5.医疗用品的微生物学监测
(1)采样时间:在消毒或灭菌处理后,存放有效期内采样。
(2)采样量及采样方法:可用破坏性方法取样的医疗用品,如输液(血)器、注射器和注射针等均参照《中华人民共和国药典》2000年版二部附录中“无菌检查法”规定执行。对不能检验地带网用破坏性方法取样的特殊医疗用品,可用浸有无菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样,被采表面<100cm2,取全部表面;被采表面≥100 cm2,取100 cm2。
(3)无菌检查:参照《中华人民共和国药典》2000年版二部附录中“无菌检查法”。
(4)细菌菌落总数检查:1ml采样液放入灭菌平皿内,用普通营养琼脂作倾注培养,放37℃温箱内培养24~48 h计数菌落。
物体表面细菌菌落总数(cfu/ cm2)= 平板上菌落数×采样液稀释倍数×采样面积(cm2)
(5)判断标准:进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数≤20 cfu/g或100 cm2,不得检出病原微生物。
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第7楼2011/05/20
6.血液和腹膜透析所用的水及透析液的微生物学监测
(1)采样点:透析用水出口(自来水经过过滤、软化、活性炭吸附、去离子逆渗透等步骤处理后的出口)、透析液出口(即透析结束时透析液离开透析器的出口)。如疑有透析液污染或严重感染病例,应增加采样点,如原水口、透析液配比机、反渗水出口、贮水罐出口、透析液进口等。
(2)细菌菌落总数检查:取透析用水或透析液1ml放入灭菌平皿内,用普通营养琼脂作倾注培养,放37℃温箱内培养24~48 h计数菌落。
细菌菌落数(cfu/ ml)= 平板上菌落数×采样液稀释倍数×所取液体的容积(ml)
(3)判断标准:透析用水的细菌落菌总数≤100cfu/ml;透析结束时,透析液细菌落菌总数≤2000cfu/ml,并且无致热原物质存在。
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第8楼2011/05/20
7.紫外线消毒效果监测
(1)紫外线灯管辐射强度值的测定:
开启紫外线灯5min后,按说明书*作,将测定波长为253.7nm的紫外线强度测定仪(指定有效期内)探头置被检紫外线灯下垂直1m的中央处,仪表稳定后所示数据即为紫外线检验地带网灯管的辐射强度值。其中30W直管型紫外灯新灯管辐射强度值≥100μW/cm2,使用中辐射强度值≥70μW/ cm2;30W高强度紫外线新灯的辐射强度值≥200μW/cm2。
(2)微生物学检测方法:开启紫外线灯5min后,将8片染菌玻片平放入灭菌器皿中,水平放于紫外线灯下适当距离照射,于4个不同间隔时间各取出2片染菌玻片,分别投入2支盛有5ml洗脱液(含1% Tween80、1%蛋白胨的9g/L氯化钠溶液)试管中振打80次,经适当稀释后,取0.5ml洗脱液放入灭菌平皿内,用普通营养琼脂作倾注培养,放37℃温箱内培养48 h计数菌落。另取2片未作照射处理的染菌玻片分别投入2支盛有5ml洗脱液试管中振打80次,余按上述*作。
计算细菌杀灭率(%)= 未照射染菌玻片回收菌数-紫外线照射染菌玻片回收菌数-未照射染菌玻片回收菌数
(3)判断标准:对指示菌杀灭率≥99.9%为消毒合格;对达到物理学检测标准时,作为消毒合格的参考标准。