仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >食品检测 > 食品添加剂 > 帖子详情

【原创】不同基质食品中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案

博纳艾杰尔

2011/06/13

私聊

食品添加剂

随着现代食品工业的发展，人们为了增加食品的风味、改善色泽和延长货架期等，采用了多种现代食品加工技术，但是不幸的是，由于种种原因，在某些食品加工过程中使用了危害人们健康的物质，比如最近出现的食品中添加“塑化剂”邻苯二甲酸酯类物质。

以往，由于人们对邻苯二甲酸酯类的安全性认识不足，多种食品都涉嫌“被添加”。博纳艾杰尔科技根据不同食品基质的具体情况，开发了一系列的检测方案，以供大家参考。

1.水性样品

此类样品包括瓶装纯净水、矿泉水，茶、果汁和功能饮料等；某些可水溶解的固体样品。可以先制成水溶液，然后全部作为待处理液，如无脂糖果。推荐前处理柱为Cleanert DEHP （500mg/6mL）。

样品处理：取10mL样品，进行固相萃取富集处理

固相萃取方法：

活化：5mL甲醇、5mL水

上样：10mL水性样品

淋洗：5mL5%甲醇水，真空抽干20min。

洗脱：5mL甲醇

检测：将洗脱液用氮气吹干后，以1mL甲醇定容，然后用液相色谱法检测。

说明：此法多适用于配套液相色谱检测，当样品中邻苯二甲酸酯类的含量较低时，需要采用固相萃取富集才能检测的情况。

一般来说，对于此类样品，可以采用正己烷液液萃取的办法，用GC/MS（灵敏度较高）直接检测。

2.低脂液体样品

此类样品包含液态奶制品、果酱、糖浆等。推荐前处理产品为Cleanert MAS-PAE管。

样品处理：向玻璃离心管中加入2mL样品，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

检测：GC/MS检测。

3.低脂固体食品

此类样品包括奶粉、饼干、糕点、果冻、奶糖等，推荐产品为Cleanert MAS-PAE管。

样品处理：取1g已制成粉末状的样品，2mL水，加入到Cleanert MAS-PAE离心管中，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基谜（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

检测：GC/MS检测。

4.高脂样品

此类样品包括植物油脂、动物油脂、奶酪、动物组织性食品等，推荐前处理柱为Cleanert PAE。

4.1 动植物油脂样品的处理

取0.2g样品，用1mL正己烷溶解，作为待净化液。

固相萃取方法：

活化：5mL正己烷

上样：全部待净化液

淋洗：7mL正己烷

洗脱：3mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v），洗脱2次，合并洗脱液。

40℃氮吹至近干（目视只剩少许粘稠油状物体），加入1mL乙腈反萃取，涡旋振荡

3min，以4000rpm转速，离心5min，轻轻地将上清液倒入2mL玻璃样品瓶中，作为待

检液。

检测：GC/MS检测。

4.2其他样品的处理

取样品0.5g，以5mL正己烷于密封玻璃瓶中超声提取，然后以4000rpm转速，离心5min，取上清液作为待净化液。若样品中含有水，视情况加入适量无水硫酸钠后，再进行上述操作。

固相萃取方法：

活化：5mL正己烷

上样：全部待净化液

淋洗：3mL正己烷

洗脱：3mL乙酸乙酯：正己烷（50:50，v/v），洗脱2次，合并洗脱液。

40℃氮吹至近干（目视只剩少许粘稠油状物体），加入1mL乙腈反萃取，涡旋振荡

3min，以4000rpm转速，离心5min，轻轻地将上清液倒入2mL样品瓶中，作为待检液。

检测：GC/MS检测。

5.复杂样品

此类样品多为油水混合态，同时添加有多种风味物质，成分比较复杂，包括方便面调味包，酱油、醋、用来调味的其它酱汁等。根据样品中的脂肪含量，对于高脂样品推荐前处理柱为Cleanert PAE-C柱，对于低脂样品推荐使用Cleanert MAS-PAEc管。

5.1 以Cleanert PAE-C柱进行样品处理，以方便面调味包为例：

取0.5g样品，加入5mL正己烷，涡旋振荡3min后，再加入500mg无水硫酸钠，涡旋振荡3min后，以4000rpm转速，离心5min，取全部上清液作为待净化液。

固相萃取方法：

活化：5mL正己烷

上样：全部待净化液

淋洗：3mL正己烷

洗脱：3mL乙酸乙酯：正己烷：甲苯（50:40:10，v/v），洗脱2次，合并洗脱液。

40℃氮吹至近干（目视只剩少许粘稠油状物体），加入1mL乙腈反萃取，涡旋振荡

3min，以4000rpm转速，离心5min，轻轻地将上清液倒入2mL样品瓶中，作为待检液。

检测：GC/MS检测。

5.2 以Cleanert MAS-PAEc管进行样品前处理，以酱油为例

样品处理：向Cleanert MAS-PAE离心管中加入2mL样品，然后加入4mL乙腈：甲苯（9:1，V/V），将离心管涡旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAEc填料，再将离心管涡旋振荡2min后，以4000rpm的转速离心5min，取上清液，以邻苯二甲酸酯检测专用针式过滤器过滤后，待检。

检测：GC/MS检测。

附件一：

高效液相色谱法检测15种邻苯二甲酸酯的含量

色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L）

流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50

Time/min	A/%	B/%
0	40	60
2	50	50
10	60	40
12	70	30
20	70	30
31	100	0
40	100	0
40.01	40	60

流速：1.0 mL/min

波长：242 nm

进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm）

样品：15种邻苯二甲酸酯

浓度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A）

溶剂：正己烷 /40%流动相A

柱温：30℃

图1 邻苯二甲酸酯标准品HPLC色谱图(样品浓度：10ppm)

（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP）

结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。

附件二

气质联用法检测15种邻苯二甲酸酯

仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS

色谱条件：

色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm

进样口：250℃，不分流进样

程序升温：50℃（1min）20℃/min 220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）

进样量：1μL

流速：1 mL/min

质谱条件：

接口温度：280℃

电离方式：EI

电离能量：70eV

溶剂延迟：7min

监测方式：SIM模式，监测离子见下表

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	SIM离子
1	8.265	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163、77
2	9.135	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149、177
3	10.888	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149、223
4	11.637	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149、223
5	11.979	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59、149、193
6	12.72	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149、251
7	13.044	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45、72
8	13.41	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149、237
9	15.552	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	104、149、76
10	15.694	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149、91
11	17.153	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149、223
12	17.81	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149、167
13	18.056	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149、167
14	20.444	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149、279
15	22.98	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	57、149、71

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。

附件三

牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率

按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	回收率
1	8.337	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	87.82%
2	9.214	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	72.31%
3	10.996	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	81.97%
4	11.759	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	77.33%
5	12.11	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	83.87%
6	12.864	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	83.83%
7	13.201	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	109.08%
8	13.576	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	86.36%
9	15.757	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	84.67%
10	15.923	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	98.33%
11	17.377	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	101.30%
12	18.041	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	92.47%
13	18.28	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	132.32%
14	20.718	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	89.73%
15	23.303	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	70.10%

某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率

按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	回收率
1	8.337	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	149.97%
2	9.214	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	93.49%
3	10.996	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	125.70%
4	11.759	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	136.89%
5	12.11	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	90.84%
6	12.864	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	82.29%
7	13.201	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	106.38%
8	13.576	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	88.14%
9	15.757	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	75.32%
10	15.923	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	89.56%
11	17.377	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	105.05%
12	18.041	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	72.94%
13	18.28	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	124.27%
14	20.718	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	78.19%
15	23.303	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	75.27%

相关话题

+关注

私聊

xiongbb

第1楼2011/06/13

都是标品的图啊，没有带基质的？

+关注

私聊

imtoxiner

第2楼2011/06/14

( ^_^ )不错嘛

+关注

私聊

博纳艾杰尔

第3楼2011/06/16

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明

1、关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项

Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。

随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。

涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。

2、关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明

采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说，

油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。

笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。

Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。

需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。

不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。

而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。

更多内容，无限更新中……

+关注

私聊

dahua1981

第4楼2011/06/16

应助达人

楼主辛苦了，这么全的资料顶起来

+关注

私聊

风铃

第5楼2011/06/20

很好的资料,正好在实验中可以参考参考

+关注

私聊

lyg638

第6楼2011/06/21

楼主想必是做了大量工作，总结出这么好的资料供大家共享，谢谢！

+关注

私聊

symmacros

第7楼2011/06/25

应助达人

谢谢楼主、分享各种基质样品的处理净化方法，特别是油脂类样品的回收率很好。

+关注

私聊

博纳艾杰尔

第8楼2011/06/25

含油脂食品中邻苯二甲酸酯类化合物的检测的样品前处理

经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下：

1、样品提取方法：

1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。

1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。

2、固相萃取方法：

2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下：

（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化；

（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中；

（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱；

（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。

收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。

2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。

补充说明：

Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。

本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。

气质联用法检测16种邻苯二甲酸酯

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

在上述色谱条件下，16种邻苯二甲酸酯类化合物的谱图如图1所示。

图1、 16种邻苯二甲酸酯类化合物选择离子色谱图

出峰顺序依次为：邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP)、邻苯二甲酸二己酯(DHXP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、邻苯二甲酸二壬酯(DNP)