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【求助】请教一个荧光强度的问题

分子荧光光谱

  • 在日立F-7000上做荧光光谱。装积分球以前,样品设定狭缝 5nm 5nm,电压 400V,相对强度在200-400。
    奇怪的是,换积分球做荧光量子效率,同样条件,荧光强度只剩下4-10,与此同时散射光强度出奇地高约为
    几千,结果导致量子效率为0。向大家请教装积分球后,荧光强度为什么减弱了这么多?
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  • jixf_1114

    第1楼2011/06/16

    怎么你这些量子效率的东西还没有搞定啊?
    安装积分球后散射光肯定会强好多啊,原来的散射光是没有被捕集的,现在都通过积分球捕集后到检测器去了,自然高的不得了。但是荧光强度变弱也是不太可能的事情,肯定还是哪里有问题啊

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  • jixf_1114

    第2楼2011/06/16

    怎么你这些量子效率的东西还没有搞定啊?
    安装积分球后散射光肯定会强好多啊,原来的散射光是没有被捕集的,现在都通过积分球捕集后到检测器去了,自然高的不得了。但是荧光强度变弱也是不太可能的事情,肯定还是哪里有问题啊

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  • ravel

    第3楼2011/06/16

    确实还没有搞定,因为样品是膜,不知道用什么夹这个膜。是黑屁股白板还是硫酸钡板。
    听到您的描述,我感觉不仅散射光要增强,荧光也应该增强。因为原来荧光也是四处发射的,也被积分球捕集了。

    现在总算明白一点了。做的时候氧化铝先做,得到散射光强度1,然后放样品,得到散射光强度2和荧光强度,外量子效率应该就是

    荧光强度/(散射光强度1-散射光强度2)

    就目前的情况来看,散射光强度减少了接近1000,荧光强度只有4-5,所以效率0.004

    我的东西效率应该有0.1以上,如果调高狭缝宽度或者电压,荧光虽可到100-200,但是散射光强度会超出范围。

    东西是成在锡纸上的一个膜,做的时候直接把锡纸盖住积分球的孔,盖是全盖住了,不知道会不会漏光,如果漏光,散射光这一块就不准了。

    jixf_1114(jixf_1114) 发表:怎么你这些量子效率的东西还没有搞定啊?
    安装积分球后散射光肯定会强好多啊,原来的散射光是没有被捕集的,现在都通过积分球捕集后到检测器去了,自然高的不得了。但是荧光强度变弱也是不太可能的事情,肯定还是哪里有问题啊

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  • jixf_1114

    第4楼2011/06/17

    你说你的膜是镀在锡纸上的?多大的面积啊?
    是不是光斑太小没有激发到?
    参照你装积分球钱的结果,装了之后应该是比较好测定的。
    至于用哪个白板现在还不重要,现在重要的是怎么把理想的效果弄出来。
    既然确定这个样品是有荧光。那么在更换积分球后,首先确认安装正确,然后确认样品放置正确。

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  • ravel

    第5楼2011/06/18

    感谢您的解答,锡纸大小3cm*3cm,膜基本覆盖整个锡纸。至于说光斑倒是有点好奇,测效率的时候,检测口的光斑又多大?可以调节吗?

    我也觉得锡纸情况下什么白板并不重要,因为锡纸把积分球的口整个给盖住了。

    关键的问题,我觉得是为什么散射光会减弱1000,而荧光只有10不到。我们那台机器这个条件下基线都有几十,是不是机器设置哪里出问题了。

    当然还有一个可能,就是我的膜太薄,以至于荧光太弱导致误差增大。

    有件事倒是我弄错了,安装积分球前后荧光并无太大变化,抱歉。

    jixf_1114(jixf_1114) 发表:你说你的膜是镀在锡纸上的?多大的面积啊?
    是不是光斑太小没有激发到?
    参照你装积分球钱的结果,装了之后应该是比较好测定的。
    至于用哪个白板现在还不重要,现在重要的是怎么把理想的效果弄出来。
    既然确定这个样品是有荧光。那么在更换积分球后,首先确认安装正确,然后确认样品放置正确。

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