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【求助】用HPLC测氯酚出现异常峰形

  • yellowdeer
    2011/06/16
  • 私聊

液相色谱(LC)


  • 第一次尝试用HLPC测2-氯酚,4-氯酚和2,4-二氯酚,按照别人文献上的方法使用50:50:2的甲醇:水:乙酸为流动相,流速1ml/min,使用C18 反相柱 (15-cm x 4.6-mm, 5 μm),280nm紫外吸收,但是发现峰形很奇怪,感觉是一个峰出了一半又出现第二个峰似的,但是我所有的样品都是单独的纯试剂配的异丙醇标准溶液,而且奇怪的是每个物质的峰都是这种形状,不像是污染的样子(下面三张图,依次是2-氯酚,4-氯酚和2,4-二氯酚,前两分钟出现的峰是溶剂异丙醇)



    后来尝试把流速加倍,效果也差不多,下面就是在2ml/min下的二氯苯

    我也试过用不加乙酸的50:50甲醇:水,效果一样。
    另外,这几个样品都是约100ppm的,但是峰都非常小,看别人的论文,检测限应该在100ppb级别的。我试过另外几个波长(210,220,254),都还没有280好。
    想请教一下,一个是这个奇怪的峰形是什么造成的,一个是为什么我测出的信号会这么低。多谢~
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  • semibeauty

    第1楼2011/06/16

    个人觉得,配标准的溶液不合适,洗脱能力强于流动相,还有就是你设置的流动相也有问题,前两个物质保留时间在死时间之前,可以说是无保留,可以调低有机相比例。。从这两方面入手再试试

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  • 有水有渝

    第2楼2011/06/16

    应助达人

    异丙醇标准溶液,为什么不用流动相溶解?进一个异丙醇看看溶剂峰在什么地方,色谱柱是新的吗,感觉像是色谱柱柱头污染了,建议清洗一下色谱柱后再做,或者溶剂效应太强导致肩峰。

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  • dahua1981

    第3楼2011/06/16

    应助达人

    是不是程序选择的不当

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  • Brooks

    第4楼2011/06/16

    1. 用异丙醇作为溶解样品的溶剂不一定合适,尝试用流动相,或者用比流动相洗脱力更弱的溶剂(比如含水量更高的溶剂)

    2. 异丙醇不应该出峰吧,我看紫外检测波长已经是280nm

    3. 这几个酚都有一定酸性,因此流动相应该用酸水,以抑制酚的电离。

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  • yellowdeer

    第6楼2011/06/17


    多谢楼上众位的回复。我之前之所以用异丙醇配标准溶液,是因为我的样品是环境样品的正己烷提取液,为了让提取液能够在极性流动相里溶解,安捷伦的客服建议用1:1的异丙醇稀释。现在根据大家的建议,我换用1:2的异丙醇:甲醇配标样(1:1甲醇不能完全溶解正己烷),出峰峰形好了一些,但是峰宽其实还是比较大,不知道有没有进一步改进的办法?

    另外,几位的回复中,“保留时间在死时间之前”是怎么判断出来的?还有清洗柱子应该用什么试剂呢?多谢

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  • 有水有渝

    第7楼2011/06/18

    应助达人

    正己烷提取液直接用氮气把正已烷吹干了再用50%甲醇溶解试试。先检查样品在50%甲醇中的溶解度。

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