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氨基柱的反相使用方法

液相色谱(LC)

  • 需要用氨基柱做糖分析,因此需要在反相条件下使用氨基柱,在网上检索了一下,关于氨基柱反相使用的条件,

    一种说法是:先用异丙醇冲洗管路;然后接上色谱柱用低流速(0.1ml/min)用30倍柱体积的异丙醇过渡,再换上流动相;

    另一种说法是:1. 先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子。
    2.以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠(LUNA)水溶液冲柱子(注意pH值切不可超过11.0),立即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲洗,再换成流动相。

    请教一下,应该用哪一种方法。
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  • zhaohua8011

    第1楼2011/08/01

    第一种就可以了!第二种是柱子的清洗活化方法!

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  • novodisk

    第2楼2011/08/01

    楼上正解,另外,可以咨询下柱子的生产厂家,厂家的意见应该是最准确的,网上好多东西都不太准确,需要甄别才能使用,我一般都是两者结合来使用,用网上搜索到的东西和厂家的工程师探讨,最后一厂家工程师的意见为准,毕竟只有他们熟悉自己的产品。

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  • novodisk

    第3楼2011/08/01

    准确一点,第二种说法中的第一个是新柱子刚开始使用时候的活化方法,第二个是柱子柱效下降后的清洗再生方法,当然,是对于氨基柱来说的。

    前一段时间,因为手头只有甲醇和乙腈,没有别的有机相,经咨询柱子生产厂家,用的纯乙腈来活化的柱子,0.2的流速,4个小时,大概是柱体机的11倍。

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  • xhrenpp

    第4楼2011/08/01

    感谢大家的帮助。第一次用氨基柱很多都不清楚。我的流动相是乙腈-水(70:30),请问1.我用异丙醇过渡完后,是不是还需要用乙腈过渡一下,再换流动相。2.异丙醇是否一定要用那么低的流速冲30倍柱体积。3.用于氨基柱的流动相中水分的最大比例不能超过多少。谢谢!

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  • novodisk

    第5楼2011/08/01

    试着回答探讨下:

    1.是否用乙腈过渡,在于看异丙醇是否和乙腈互溶,若互溶,应该不用过渡了,直接换流动相就可以,因为你的流动相本身就是70%的乙腈水。
    2.第二个我也有疑问,按照柱体积约4.2ml(可根据柱子参数计算)来计算,30倍就是126ml,0.1的流速需要冲柱子21小时,太可怕了,我一般没有冲这么长时间,我使用的氨基柱的柱保护液是纯乙腈,流动相是75%的乙腈水,因此,使用时直接用流动相,不过,总觉得柱子用的时间很短,一个季度就不行了,平均一周也就使用一次,是否和我使用方法有关?
    3.这个真不知道。

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  • 冰块

    第6楼2011/08/02

    1、不需要乙腈过渡,两相可以很好的互溶的
    2、流速可以提高的,起码我没用出问题,但是要注意控制压力。
    3、不同的柱子不一样有的可以短时间耐受纯水

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  • Insm_e31596b9

    第7楼2018/11/03

    你好,我想请问一下,你的氨基柱是安捷伦氨基柱吗?

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  • dadgoh

    第8楼2018/11/03

    应助达人

    使用第一种方法,用异丙醇过度到流动相就可以。

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