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反相柱提高水相比例为啥保留时间反而提前了呢

langtao9948

2011/09/07

液相色谱（LC）

今天碰到一个很奇怪的事情，做猪肉中5种磺胺残留，方法参考的是无公害猪肉的附录E，C18的250mm柱，流动相比例是甲醇：乙腈：水：乙酸=2：2：9：0.2（实际体积比），结果发现有两个5分钟内出的峰分离度不好，于是增加了一个梯度，原有流动相：水=90：10，按道理是应该分离度提高，保留时间增加，但是实际情况是却是正好相反，把水相提高到20%，结果保留时间更加进一步减低，分离度进一步减小，为什么呢，期待高手解答，是不是因为有乙酸的缘故？

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耐士科技

第1楼2011/09/07

乙酸可延缓出峰时间，但是反相分离我们一般讲的都是有机相占的比例，随着有机相的增加，保留时间变短，我想跟你的实验结果是相对应的。

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秦时明月

第2楼2011/09/07

磺胺类呈碱性吧，增加了水的比例，等于增大了流动相的PH值，样品更容易被流动相洗脱，所以保留时间减小了。

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有水有渝

第3楼2011/09/08

应助达人

楼主你的色谱柱没有拿错吧，2%的水对PH的影响很小，完全在方法的耐用性范围之内。

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阿怪

第4楼2011/09/08

碱性物质如果增加流动相的pH应该是增加它的保留能力啊
yelev1(yelev1) 发表:磺胺类呈碱性吧，增加了水的比例，等于增大了流动相的PH值，样品更容易被流动相洗脱，所以保留时间减小了。

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阿怪

第5楼2011/09/08

是不是可能增加了水相比例后，增加了乙酸的电离（因为我看你的乙酸比例有1.5%），故而增加了磺胺的电离，或者更好的屏蔽了硅醇基对磺胺的离子吸附作用？

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langtao9948

第6楼2011/09/08

多谢大家的意见。大家多帮我想想原因，等忙完中秋节，我回头做个方案走一下试试，看看倒底是什么原因

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langtao9948

第7楼2011/09/08

可能是我没有说明清楚，这个流动相水占很大比重啊。。。。
有水有渝(xky0230699) 发表:楼主你的色谱柱没有拿错吧，2%的水对PH的影响很小，完全在方法的耐用性范围之内。

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langtao9948

第8楼2011/09/08

您分析得没错，但我的试验是有机相减少了，保留时间变短。。。。
耐士化工(SH102364) 发表:乙酸可延缓出峰时间，但是反相分离我们一般讲的都是有机相占的比例，随着有机相的增加，保留时间变短，我想跟你的实验结果是相对应的。

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langtao9948

第9楼2011/09/08

柱子我用的是WATERS的XBridge系列的C18的柱子

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Longer

第10楼2011/09/09

PH变化引起离子化发生变化，进而影响保留。规则如下：
PH≈PKa时，流动相中PH值的微小变化都会引起样品保留时间有较大的变动
大部分的氨基化合物在PH<9时，都被质子化， PH减小有利于减弱氨基化合物的保留，减小其与硅羟基的相互作用，使色谱峰变窄
碱性化合物随着PH的减小而保留减弱
酸性化合物随着PH的增大而保留减弱

另外希望楼主把流动相表示更清楚些，等度和梯度都说清楚，还有各自加酸的量。

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