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手性色谱柱常见问题

有水有渝

2012/01/04

液相色谱（LC）

Q：正相手性色谱柱使用前需要注意什么?

A：将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。

Q：正相手性色谱柱中保存液是什么?

A：正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。

Q：新柱CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与原来的大赛璐手性柱有什么区别？

A：CHRALPAK IA和CHRALPAK IB是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA和CHRALPAK IB柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。CHRALPAK IA和CHRALPAK IB与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA和CHRALPAK IB上得以分开。CHIRALPAK®IA是将淀粉-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µm），相应的涂敷型色谱柱是CHIRALPAK®AD （CHIRALPAK®AD-H）；CHIRALPAK®IB是将纤维素-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）, 相应的涂敷型色谱柱是CHIRALCEL®OD （CHIRALCEL®OD-H）；CHIRALPAK®IC将纤维素-3,5-二氯苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面（5 µM）（注意：相应的涂敷型色谱柱没有商品化）。

Q：CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL OD-H、CHIRALCEL OJ-H四款正相色谱柱的区别是什么？

A：区别是固定相的种类不同。CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。不同种类的多糖衍生物决定了这些手性柱的分离对象各不相同，既相互包含，又相互补充。

Q：优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？

A：正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种类、更换手性柱。

Q：建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？

A：流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。如果是中性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加二乙胺，添加剂的量一般为0.1 %。

流动相中醇的含量一开始可以使用30%，根据样品出峰的快慢和分离度再调整醇的含量。

流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。

Q：建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？

A：根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。

Q：CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD是什么区别？

A：CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK AD-H是5 μm，CHIRALPAK AD是10 μm。CHIRALPAK AD-H能代替CHIRALPAK AD并且CHIRALPAK AD-H柱效更高。

Q：手性柱谱图中异构体的分离度下降了，这可能是什么原因，该怎么办？

A：分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。

Q：正相手性色谱柱柱压高了怎么办？

A：手性柱压力高的原因有可能是流动相中醇的含量太高，或者液相流路中有堵塞，或者柱头有样品析出，或者填料被压缩柱头塌陷等。针对不同的原因请有针对性的采取相应的措施。如果是流动相中醇含量太高，则需要升高温度或者降低流速。如果液相流路中有堵塞需要排除堵塞。如果柱头有样品析出则需要使用流动相溶解样品以及样品预处理除掉样品中易析出的成分。如果填料被高压压缩柱头塌陷，则需要重新购买新的手性柱。

Q：正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？

A：正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来，再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。

Q：手性柱使用完了之后如何清洗保存？

A：正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需要用水/乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。

Q：正相手性色谱柱的柱压范围是多少？

A:正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H中的柱压绝对不能超过9.8 MPa，最好不超过5 MPa。所以建议在实际使用过程中，在液相仪器上设置泵的保护压力为6 MPa，这样一旦系统的压力超过6 MPa，泵就会自动停止运行，保护手性柱不受高压破坏。

A:正相手性柱的固定相为涂敷了手性多聚物(直链淀粉或纤维素衍生物)的球形硅胶。由于是物理涂敷，必须要注意流动相的选择。正相手性柱高塔板数H系列有5种，分别为CHIRALPAK AD-H/AS-H和CHIRALCEL OD-H/OJ-H/OB-H。这几根柱子能分离80%以上的手性化合物。该类柱的填料粒径为5μm。与装有10μm填料的传统柱相比，性能得到了提高，柱效更高，分辨率更好。柱长除了标准型号的250mm外，还备有用于快速分析的150mm的型号。

Q:日本大赛璐（Daicel ）公司的手性柱OC-H的特点？
A:日本大赛璐（Daicel ）公司的手性柱OC-H是抗癌药奥沙利铂分析专用柱。Chiralcel OC-H 以硅胶填料为基体材料,以纤维素三苯基氨基甲酸酯衍生物为手性固定相，符合国家药品标准。Chiralcel OC-H能适合甲醇流动相。

附件：

手性色谱柱常用问题.doc

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有水有渝

第1楼2012/01/04

应助达人

以上内容应该可以回答一些版友关于手性色谱柱使用的问题。

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蓝人

第2楼2012/01/04

应助达人

LZ真好，虽然没用过手性，但是先存，以备万一

0

tangtang

第3楼2012/01/04

手性柱都很贵，使用后要标明保存的溶液，方便下次使用。

0

suiniubei

第4楼2012/01/04

补充说明一下，手性柱如果脏了，可以用不同浓度的异丙醇来冲洗的。当然，流速要小，如果是纯异丙醇，流速不能超过0.2ml/min。但要注意，这样冲洗完之后，要梯度到正己烷：异丙醇＝90：10的流动相中保存。

　这是我的一点经验。

0

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puremilk

第5楼2012/01/04

这玩意就是娇贵，用起来都得小心

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xuhua987

第6楼2012/01/05

看来用到手性分离的版友不在少数啊，要是能分享一下或者推荐些关于手性流动相的知识就更好了。

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xiaowang268

第7楼2012/01/05

很详细，也很全面啊，不错

0

zhaohua8011

第8楼2012/01/05

用到的比较少，写的还是比较详尽！

0

sopheia

第9楼2012/01/30

正好缺乏这方面的知识，感谢楼主

0

第10楼2012/04/09

曾经做了一分离，对些产品的手性分离，楼主总结的很好。

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