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求助:关于人体血清中蛋白质的去除方法???

液相色谱(LC)

  • 我是个液相的新手,接触不到半年,以前是学习临床的,因为工作的原因,所以现在改作液相,这两天在作血清的时候遇到了好大的麻烦,就是需要测定的成分(水溶性的)的保留时间点上始终有个特别大的蛋白质,改了好多次的流动相及血清都经过几个预处理,那些个讨厌的家伙始终如一的在那儿(保留时间随着流动相改变而变,始终在我需要测定的成分周围出现,而且峰面积特别的大,还有其他的地方也有好多的蛋白质峰,每次进样前我都用0.2微米的一次性过滤器过滤后再进的样,流动相是甲醇/甲醇(10%):乙酸(0.5%)水溶液(89.5%)=0-25/100-75(梯度在30min变化,梯度曲线为6,柱子为迪马公司的C18 150*4.6钻石柱子)监测器为waters 2996 进样器为waters 2995 我的邮箱是jervis36@163.com或者电话028--89192580,QQ250116810谢谢各位高手了啊!!!
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  • guanzm1997

    第1楼2006/03/31

    可以用乙腈沉淀蛋白。可以用1:2的比例,当然乙腈越多越好,沉淀的会越完全。其实最好液液萃取,但你的成分是水溶性的。所以沉淀蛋白吧。

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  • 东方王

    第2楼2006/04/01

    楼主已经试过几种前处理血清的方法,是哪几种啊?

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  • Easy-Boy

    第3楼2006/04/03

    用液液萃取,用二氯甲烷萃去杂质。或者沉淀蛋白质。

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  • Ω 离子分析

    第4楼2006/04/03

    比较彻底的是使用超高速离心机,直接祛除蛋白质。

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  • Easy-Boy

    第5楼2006/04/03

    同意这种说法,离心也是去除蛋白质的一种好方法。

    who1235 发表:比较彻底的是使用超高速离心机,直接祛除蛋白质。

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  • 没谱

    第6楼2006/04/03

    不知道帖主的主成分和杂质蛋白分子量相差多大,可以考虑用超滤的方法。
    如果只是检测,可以使用一次性超滤离心管,在普通离心机即可使用。

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  • jervis36

    第7楼2006/04/03

    试过了,用的是1:3的倍数,还用过甲醇,都没有达到预期目的,而且每次我都用了8500r/min的离心机离心了30min的,thanks !

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  • jervis36

    第8楼2006/04/03

    我还用过水浴法,水浴后再加甲醇或则已腈沉淀得方法,每种方法后都是高速离心后取得上清液再用0.2um的过滤器过滤后进的样,还是不行啊!555555

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  • 阿峰

    第9楼2006/04/04

    用GPC,或简单柱层析试一试。

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  • 杰斐逊

    第10楼2006/04/04

    离心机的转数高一些试试,14000rpm怎么样

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