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液相色谱(LC)
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高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
biaozhunwuzhi
2012/03/30
私聊
液相色谱(LC)
1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜。
2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3). 打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4). 进入HPLC控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
5). 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵,直接在泵的出水口,用针头抽取。冲洗进样阀,需要在manual菜单下,先点击purge,再点击start,冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6). 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。点击injure,选用合适的流速,点击on,走基线,观察基线的情况。
7). 设计走样方法。点击file,选取select users and methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法,点击new method。选取需要的配件,包括进样阀,泵,检测器等,根据需要而不同。选完后,点击protocol。一个完整的走样方法需要包括:a.进样前的稳流,一般2-5分钟;b.基线归零;c.进样阀的loading-inject转换;d.走样时间,随不同的样品而不同。
8). 进样和进样后操作。选定走样方法,点击start。进样,所有的样品均需过滤。方法走完后,点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后,再用上面的方法走一段基线,洗掉剩余物。
9). 关机时,先关计算机,再关
液相色谱
。
10). 填写登记本,由负责人签字。
注意事项:
1). 流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2). 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。
3). 所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4). 压力不能太大,最好不要超过2000 psi。
12、柱使用—段时间后,柱效下降,出现峰拖尾。
柱入口床层被污染。 用强溶剂冲洗20-30ml,若效果不明显应废弃。
13、进样量增大与峰面积增加不成正比.即进样量与峰面积不是线性关系。
样品在流动相中的溶解度小,只有部分样品被流动相冲如色谱柱中而另一部分则沉积在柱人口端。 ①用流动相溶解样品。②样品的浓度不宜太大。④进样量不宜过大。
14、使用缓冲液作流动相时,柱压降升高很快。
霉菌生长所致。 ①在流动相中加入有毒物质或加叠氯化钠防止霉菌生长。②实验结束后先用纯水后用MeOH各冲洗20-30ml后关机。
15、用5µm颗粒填料柱时, 以MeOH/H20作流动相柱压较高。
MeOH与水之间由于氢键作用黏度增大。 可用乙腈/水体系使柱压降低,分离效率更好。
16、长时间放置的色谱柱,出现双峰。
柱床层出现干裂。 柱放置时,最好使用相应的溶剂充填好,防止受大的机械震动,如床层干裂应废弃掉。
17、流动相洗涤强度由弱渐强时出现很多杂质峰。
强溶剂将弱溶剂洗不出的杂质冲出来。 不影响柱的性能。
18、柱使用一段时间后保留值逐渐缩短。
柱中固定相流失所致。 ①更换色谱柱。②检查所用的色谱条件是否合适。
19、在U V色谱图中,靠近死时间处出现负峰。
①进样时压力波动所致。②样品溶剂比流动相的UV吸收值低。 ①采用阀进样。
②用流动相溶解样品。
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第1楼
2012/03/30
再补充一点 开机后 还有换流动相之后,要记得排气泡
0
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+关注
私聊
houjjun
第2楼
2012/04/01
还得冲洗泵
0
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