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实验室菌种的传代和复壮方法

省部重点实验室

2012/05/03

生命科学仪器综合讨论

1、简述
菌种的传代系装菌种在使用一段时间后，菌种数量减少，将菌种进行传代培养，增加数量经多次传代后，菌种有衰退、变异现象，对菌种进行复壮，得到纯化菌种。
2、菌种传代
2.1 仪器及培养基
酒精灯、接种环、营养琼脂培养基。
2.2 操作步骤
2.2.1 将新鲜的无菌斜面琼脂养基、酒精灯、接种环和将要传代的菌种管均放置于洁净工作台上，备用。
2.2.2 点燃酒精灯，以左手持菌种管，右手持接种环，将接种环通过火焰消毒俟冷后，从菌种管中挑取菌落。
2.2.3 左手立即换取斜面培养基管，以右手无名指和小指拔取棉塞（先转动棉塞后拔去），夹持于手指间。
2.2.4 立即将管口通过火焰灭菌后将接种环伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒涂布。
2.2.5 轻轻取出接种环，用棉塞塞住管口，立即将接种环通过火焰消毒。
2.2.6 将接种好的管口用牛皮纸包位，置于35±2℃恒温箱中培养18-24小时，取出置4-6℃冰箱中保存。
3、菌种复壮
3.1 仪器及培养基
酒精灯、接种环、曙红亚甲蓝琼脂培养。
3.2.1 菌种在经过几次传代之后，对其进行革兰氏染色、镜检。
3.2.2 染色、镜检后若发现菌种有退化、变异现象，则将其划线接种在相应的培养基平板上，于35±2℃培养18-24小时后，观察生长菌的形态特征。
3.2.3 挑取具有典型特征的菌落再次进行划线接种培养后进行革兰氏染色、镜检。
3.2.4 选择特征明显，生长良好的菌种，将其接种于营养琼脂培养基斜面，培养后置冰箱中保存。

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