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保留时间向后推移

液质联用(LCMS)

  • 本人 新手 也不是能经常做LC-MS联用的人 ,很多不懂在积极学习中

    1.今天做样品的时候发现我样品的保留时间没有变化,但是内标的保留时间跟所有以前的样品的保留比,向后推移了,我不知道这是咋回事情,然后所有的条件都没有动过的,这是咋回事呀,内标是用的氘代标记物,

    然后今天上样品之前,质谱做过未知药物的定性,但是已经平衡了四分钟,冲洗十分钟,我能想到的就只有这些了


    做的内标保留时间后移的谱图,第二副是我以前的谱图,因为还在进样品,我手机拍了几幅不甚清楚,敬请原谅,然后现在发现后面又有几幅图的内标相比之前保留时间提前了,弄的比较粗糙,对不起大家了。
    2.回收率的问题

    因为我的回收率很低,而且重现性很差,我是每个都加500ng/ml,的内标的,现在是否可以考虑用基质加标做标准曲线,我是不是可以用这个曲线来算我的样品里的浓度
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  • chy57589893

    第1楼2012/06/21

    你的图呢?我怎么看不到呀
    最好你先说下你做的是什么样品,基质加标是应该做的

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  • happy爱米粒

    第2楼2012/06/21

    纯标准里的内标和样品里的内标都向后偏移了吗?偏移了多大?如果用内标定量问题不大。基质加标做曲线不太好做

    cyohope(cyohope) 发表:本人 新手 也不是能经常做LC-MS联用的人 ,很多不懂在积极学习中

    1.今天做样品的时候发现我样品的保留时间没有变化,但是内标的保留时间跟所有以前的样品的保留比,向后推移了,我不知道这是咋回事情,然后所有的条件都没有动过的,这是咋回事呀,内标是用的氘代标记物,

    然后今天上样品之前,质谱做过未知药物的定性,但是已经平衡了四分钟,冲洗十分钟,我能想到的就只有这些了

    图片始终发不上,编辑器根本点不动,抱歉
    做的内标保留时间后移的谱图,第二副是我以前的谱图,因为还在进样品,我手机拍了几幅不甚清楚,敬请原谅

    2.回收率的问题

    因为我的回收率很低,而且重现性很差,我是每个都加500ng/ml,的内标的,现在是否可以考虑用基质加标做标准曲线,我是不是可以用这个曲线来算我的样品里的浓度

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  • happy爱米粒

    第3楼2012/06/21

    关于谱图楼主可以用附件形式上传,我帮你贴出来

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  • cyohope

    第5楼2012/06/21

    图之前一直没倒腾出来,现在倒腾出来接粗糙的图 抱歉哈。我做的样品是水里的 环境内分泌干扰物

    chy57589893(chy57589893) 发表:你的图呢?我怎么看不到呀
    最好你先说下你做的是什么样品,基质加标是应该做的

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  • cyohope

    第6楼2012/06/21

    唉 ,回复自己的帖子,每次都是IP变化,不能回复,好抑郁。

    今天的进样品之前,我并没有进混合标准样,然后刚开始内标时间相比前天的混标是拖后,后面有几个样品相比前天的居然提前,然后又有几个样品居然是正常的,我纠结了,这是咋回事呀

    木有才(xgy2005) 发表:关于谱图楼主可以用附件形式上传,我帮你贴出来

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  • continuum

    第7楼2012/06/22

    方便的话
    给下 column 种类
    跟条件

    有可能是条件的问题
    跟 LC的问题

    LC 的问题你去看一下isocratic的时候
    压力变化是否很大

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  • happy爱米粒

    第8楼2012/06/22

    楼主是否充分置换流动相了,充分平衡色谱柱了

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  • zhulityx

    第9楼2012/06/27

    楼主你可以考虑你的样品里的基质效应,就是处理过程有没有发生变化,如溶剂的新旧等。这个有可能也是色谱柱的问题。

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  • cyohope

    第10楼2012/06/28

    嗯,我也觉得有可能是基质问题,但是这个实验不是我的,除掉我之外的人都不认为存在基质这个问题,我能自己配置的流动相现在都是当天早晨配好,水也是新鲜的。。除掉甲醇是隔了一天的,都是新鲜的,柱子应该没有问题的,充分平衡而且柱压正常。(我 不知道除掉压力之外还有其他的可见的参数评断柱子的好坏)

    还有关于预处理的SPE小柱子,没有用进口的,具体牌子我就不说了,回收率非常的低,低到我老有一种错觉目标物没有吸附上去,但是因为本人自己的手法不熟练,或者以为自己的活化啥的没做到家,暂时还没有认定是小柱的问题,我想问的是,有么有可能是柱子本身的问题,操作淋洗液什么的,我俨然已经仔细又仔细,比例也正常,也是这个前处理SPE小柱子的经销商提供的方法,文献上也是这样的方法。

    关于内标,我是在进样SPE小柱子前加的,做成的标准曲线就是 (目标物浓度/内标浓度:目标峰面积/内标峰面积),那这样的问题是,做出来这个浓度的 回收率。有人跟我说,这个不是真实的回收率呀。我画标准曲线的时候。是不是 还是只要画 浓度和峰面积的比,内标不要弄出来的。

    还有其实我根本不是很明白内标的作用到底是啥,我只是觉得有了内标,目标物的峰会在很低浓度的时候也很好找,其他我不是很明白的,还有这个内标到死是在进预处理之前加 还是在进液质前加,看到很多用放射性物质做内标的试验中,多是起到一个示踪作用,所以我纠结了

    好多不懂 好多无奈,好多好多委屈因为实验而起,我的疑惑很多,我的一切都还是开头,谢谢指导

    原文由 zhulityx(zhulityx) 发表:楼主你可以考虑你的样品里的基质效应,就是处理过程有没有发生变化,如溶剂的新旧等。这个有可能也是色谱柱的问题。

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  • 该帖子已被版主-happy爱米粒加3积分,加2经验;加分理由:很详细的过程记录,辛苦了
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  • happy爱米粒

    第11楼2012/06/28

    预处理SPE可以做分布试验确定是哪里的损失,内标是可以起到校正预处理和基质干扰的作用的,如果在预处理前加入,就是前者,反之后者,呵呵,欢迎常来分享试验过程,我们一起探讨交流,一起进步学习

    cyohope(cyohope) 发表:嗯,我也觉得有可能是基质问题,但是这个实验不是我的,除掉我之外的人都不认为存在基质这个问题,我能自己配置的流动相现在都是当天早晨配好,水也是新鲜的。。除掉甲醇是隔了一天的,都是新鲜的,柱子应该没有问题的,充分平衡而且柱压正常。(我 不知道除掉压力之外还有其他的可见的参数评断柱子的好坏)

    还有关于预处理的SPE小柱子,没有用进口的,具体牌子我就不说了,回收率非常的低,低到我老有一种错觉目标物没有吸附上去,但是因为本人自己的手法不熟练,或者以为自己的活化啥的没做到家,暂时还没有认定是小柱的问题,我想问的是,有么有可能是柱子本身的问题,操作淋洗液什么的,我俨然已经仔细又仔细,比例也正常,也是这个前处理SPE小柱子的经销商提供的方法,文献上也是这样的方法。

    关于内标,我是在进样SPE小柱子前加的,做成的标准曲线就是 (目标物浓度/内标浓度:目标峰面积/内标峰面积),那这样的问题是,做出来这个浓度的 回收率。有人跟我说,这个不是真实的回收率呀。我画标准曲线的时候。是不是 还是只要画 浓度和峰面积的比,内标不要弄出来的。

    还有其实我根本不是很明白内标的作用到底是啥,我只是觉得有了内标,目标物的峰会在很低浓度的时候也很好找,其他我不是很明白的,还有这个内标到死是在进预处理之前加 还是在进液质前加,看到很多用放射性物质做内标的试验中,多是起到一个示踪作用,所以我纠结了

    好多不懂 好多无奈,好多好多委屈因为实验而起,我的疑惑很多,我的一切都还是开头,谢谢指导

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