幽门螺杆菌知识介绍

幽门螺杆菌的形态学特征


幽门螺杆菌（Hp）是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm.革兰染色阴性。有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。

　　电镜下，菌体的一端可伸出2～6条带鞘的鞭毛。在分裂时，两端均可见鞭毛。鞭毛长约为菌体1～1.5倍。粗约为30nm.鞭毛的顶端有时可见一球状物，实为鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可见一个圆球状根基伸入菌体顶端细胞壁内侧。在其内侧尚有一电子密度降低区域。鞭毛在运动中起推进器作用，在定居过程中起抛锚作用。

幽门螺杆菌的感染与致病机理


近二十多年的研究发现，幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织（MALT） 淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构 （WHO/IARC） 将幽门螺杆菌定为Ⅰ类致癌原。

　　Hp感染Hp进入胃后，借助菌体一侧的鞭毛提供动力穿过黏液层。研究表明，Hp在粘稠的环境下具有极强的运动能力，强动力性是Hp致病的重要因素。Hp到达上皮表面后，通过粘附素，牢牢地与上皮细胞连接在一起，避免随食物一起被胃排空。并分泌过氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶，以保护其不受中性粒细胞的杀伤作用。Hp富含尿素酶，通过尿素酶水解尿素产生氨，在菌体周围形成“氨云”保护层，以抵抗胃酸的杀灭作用。

　　Hp与胃炎正常情况下，胃壁有一系列完善的自我保护机制（胃酸、蛋白酶的分泌功能，不溶性与可溶性粘液层的保护作用，有规律的运动等），能抵御经口而入的千百种微生物的侵袭。自从在胃粘膜上皮细胞表面发现了hp以后，才认识到hp几乎是能够突破这一天然屏障的唯一元凶。goodwin把Hp对胃粘膜屏障在破坏作用比喻作对“屋顶”的破坏给屋内造成灾难那样的后果，故称为“屋漏”学说。目前对hp感染的研究能归入这一学说的资料最多。主要包括：①使hp穿透粘液层在胃上皮细胞表面定居的因素；②对胃上皮细胞等起破坏作用的毒素因子；③各种炎症细胞及炎症介质；④免疫反应物质等。

　　这些因素构成hp感染的基本病理变化，即各种类型的急、慢性胃炎。其中近年来得到最重要关注的是空泡毒素vaca、细胞毒素相关蛋白质caga，和尿素酶等的作用及其分子生物学研究。

　　Hp与消化性溃疡hp感染明显地增加了发生十二指肠和胃溃疡的危险性。大约1/6hp感染者可能发生消化性溃疡病。治疗hp感染可加速溃疡的愈合和大大降低溃疡的复发率。不用抑酸剂，单用抗hp药物治疗，表明也能有效地治愈胃和十二指肠溃疡。hp感染已经与一些引起溃疡病的原因找到了联系。例如：胃酸增加、十二指肠胃化生、粘膜屏障性质的改变、胃窦粘膜产生炎症代谢产物等。这些患者中的发现已在动物实验中得到初步证明。实际上消化性溃疡涉及几个复杂的相互作用的机制。如细菌的毒力因素（vaca和caga等），宿主的反应性（例：如易感性的遗传、十二指肠上皮的胃化生、粘膜屏障和炎症的相互作用、泌酸反应、神经调节作用）和环境因素（例如饮食、获得感染的年龄）的综合作用导致溃疡的最后结果。过去临床上对溃疡的发生有一句谚语，叫“no acid，no ulcer”。现在，从现代理论来看，“no hp，noulcer”应得到更多地强调。

　　Hp与胃癌从近年来对Hp感染的大量研究中提出了许多Hp致胃癌的可能机制：①细菌的代谢产物直接转化粘膜；②类同于病毒的致病机制，hpdna的某些片段转移入宿主细胞，引起转化；③hp引起炎症反应，其本身具有基因毒性作用。在这些机制中，后者似乎与最广泛的资料是一致的。

幽门螺旋杆菌感染检测方法

幽门螺旋杆菌感染的检查方法很多，主要包括细菌的直接检查、尿毒酶活性测定、免疫学检测及聚合酶链反应等方法。

　　(1) 细菌的直接检查

是指通过胃镜检查钳取胃粘膜(多为胃窦粘膜)作直接涂片、染色，组织切片染色及细菌培养来检测幽门螺旋杆菌。其中胃粘膜细菌培养是诊断幽门螺旋杆菌最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”，同时又能进行药敏试验，指导临床选用药物。

　　(2) 尿毒酶检查

因为幽门螺旋杆菌是人胃内唯一能够产生大量尿毒酶的细菌，故可通过检测尿毒酶来诊断幽门螺旋杆菌感染。尿毒酶分解胃内尿毒生成氨和二氧化碳，使尿素浓度降低、氨浓度升高。基于此原理已发展了多种检测方法：①胃活检组织尿毒酶试验；②呼吸试验；③胃液尿素或尿素氮测定；④15N-尿素试验。

　　(3) 免疫学检测

目前已有多种免疫学检测方法，通过测定血清中的幽门螺旋杆菌抗体来检测幽门螺旋杆菌感染，包括补体结合试验、凝集试验、被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联合吸附测定(ELISA)等。

　　(4) 聚合酶链反应技术

正常胃粘膜很少检出幽门螺旋杆菌(0～6%)，慢性胃炎患者幽门螺旋杆菌的检出率很高，约50%～80%，慢性活动性胃炎患者幽门螺旋杆菌检出率则更高，达90%以上。

　　(5) C－14呼气检测仪＋呼气检测口袋

只需要吹气5分钟外，无其他任何不适。 该方法使众多高血压、心脏病及对胃镜过敏的患者避免了做胃镜的不适感，是目前理想的检测方法之一。是目前检测HP的医学界的金标准.敏感性95%，特异性 95%~100%。

幽门螺杆菌，Helicobacter pylori，简称Hp。首先由巴里·马歇尔(Barry J. Marshall)和罗宾·沃伦(J. Robin Warren)二人发现，此二人因此获得2005年的诺贝尔生理学或医学奖。

形态学特征

幽门螺杆菌是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。革兰染色阴性。有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。

电子显微镜下，菌体的一端可伸出2～6条带鞘的鞭毛。在分裂时，两端均可见鞭毛。鞭毛长约为菌体1～1.5倍。粗约为30nm。鞭毛的顶端有时可见一球状物，实为鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可见一个圆球状根基伸入菌体顶端细胞壁内侧。在其内侧尚有一电子密度降低区域。鞭毛在运动中起推进器作用，在定居过程中起抛锚作用。

生理学和分子生物学特征

幽门螺杆菌是微需氧菌，环境氧要求5～8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长。许多固体培养基可作幽门螺杆菌分离培养的基础培养基，布氏琼脂使用较多，但需加用适量全血或胎牛血清作为补充物方能生长。常以万古霉素、TMP、两性霉素B等组成抑菌剂防止杂菌生长。

幽门螺杆菌对临床微生物实验中常用于鉴定肠道细菌的大多数经典生化实验不起反应。而氧化酶、触酶、尿素酶、碱性磷酸酶、r－谷氨酰转肽酶、亮氨酸肽酶这七种酶反应是作为幽门螺杆菌生化鉴定的依据。

幽门螺杆菌的全基因序列已经测出，其中尿素酶基因有四个开放性读框，分别是UreA、 UreB、 UreC和UreD。UreA和UreB编码的多肽与尿素酶结构的两个亚单位结构相当。幽门螺杆菌的尿素酶极为丰富，约含菌体蛋白的15%，活性相当于变形杆菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成氨云保护细菌在高酸环境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分别编码空泡毒素和细胞毒素相关蛋白。

根据这两种基因的表达情况，又将幽门螺杆菌菌株分成两种主要类型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因并表达两种蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表达两种蛋白，尚有一些为中间表达型，即表达其中一种毒力因子。现在多认为Ⅰ型与胃疾病关系较为密切。

培养

用于培养的胃粘膜活检标本应置于生理盐水、营养肉汤或20％葡萄糖中，然后立即转送到细菌室培养。如果标本不能在4个小时内培养，就应放在4摄氏度保存，但不宜超过24小时。长期保存用于培养的活检标本的唯一方法是将其置于－70摄氏度或液氮之中。

培养幽门螺杆菌的培养基包括非选择性及选择性两种。常用的非选择性培养基基础为脑心浸液琼脂、哥伦比亚琼脂、胰蛋白胨大豆琼脂以及Wilkins-Chalgren琼脂。培养基中需加7％－10％的去纤维蛋白马血。羊血、人血、马血清、氯化血红素、淀粉、胆固醇或环糊精(cyclodextrins） 也可代替马血。选择培养基则是在上述培养基中添加一定的抗菌药物，如万古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B以及甲氧苄氨嘧啶（TMP）。

常用的有Skirrow 配方及Dent配方。前者原用于弯曲菌的培养，亦可用于幽门螺杆菌培养。后者为前者的改良，即将多粘菌素用头孢磺啶取代，因为少数（5％左右）幽门螺杆菌菌株对多粘菌素敏感。Drnt配方为万古霉素（10mg／L）、头孢磺啶（5mg／L）、TMP（5mg/L）以及二性霉素B（5mg／L）。有报道指出，部分菌株对啶酸敏感，因而培养基中应尽量避免作用该抗生素。

1．螺杆菌属的主要特点及分类

螺杆菌属（Hilicobacter）是一群氧化酶和触酶阳性、微需氧、37℃能够生长、在25℃和42℃均生长不良的革兰阴性弯曲菌。本属细菌最早根据形态染色、培养条件等归于弯曲菌属，1989年Goodwin根据其超微结构、酶活性、脂肪酸序列、生长特性等的不同，建议将其从弯曲菌属中划分出来而成立一个新的属Hilicobacter（螺杆菌属）。本属中现已鉴定的有19个种，研究得最多、最常见的是幽门螺杆菌（H.pylori，Hp）。

2．幽门螺杆菌的细菌特性

（1）形态染色 HP为革兰阴性、无芽孢、呈螺旋状弯曲的杆菌，尤其在胃黏膜环境中，HP具有典型的螺旋形或弯曲形形态，但在陈旧培养物中菌体可呈圆球状；大多数细菌具有位于菌体一端的多根带鞘鞭毛，运动活泼。

（2）培养特性 HP为微需氧菌，在需氧及厌氧环境下均不能生长，在潮湿环境37℃同时提供5％～10％O2、5％～12％CO2的条件下生长良好，5％～10％H2可刺激其生长；最适生长温度35℃～37℃，30℃和42℃均生长不良，此点可与其他弯曲菌相区别，pH5.5～8.5均能生长；营养要求高，普通培养基不能生长，常用的培养基有心脑浸出液琼脂、布氏琼脂、哥伦比亚琼脂等，培养基中需补充一些特殊物质如血液、血清、淀粉、活性炭等，在Campy-BAP培养基上不生长。选择培养基可用改良的Skirrow琼脂培养基加入万古霉素、两性霉素和cefsulodin，本菌在非选择性血平板上经3～5天孵育后形成小的半透明灰色菌落，有微弱的溶血环，革兰染色很浅。

（3）生化反应生化反应不活泼，氧化酶和触酶阳性，不分解任何糖类，脲酶强阳性，可与本属其他细菌区别，也是检测HP的快速诊断方法之一。具体生化特征见表13-2。

表13-2 螺杆菌属各菌种的生化特征

幽门螺杆菌及其实验室鉴定

2．临床意义

HP有较强的鞭毛动力和对胃黏膜/黏液有较强的黏附力，使HP能在接近中性的黏膜层中定植，产生强活性的尿素酶，分解尿素，在菌体周围形成保护性氨环境，以抵抗胃黏膜上皮细胞分泌的胃酸；HP产生的蛋白酶能有效分解黏液蛋白，提供营养。

HP在胃内定植后，通过对胃黏膜上皮细胞的黏附性、胃肠激素的作用、细胞壁脂多糖中脂质A的致炎作用、产生多种酶（包括：尿素酶、蛋白酶、过氧化氢酶、脂酶和磷脂酶等）以及产生的细胞毒素等等，这些因素的共同作用导致临床疾病的发生。在临床上主要引起消化性溃疡（十二指肠溃疡、胃溃疡）、慢性活动性胃窦炎等，长期感染易发展为萎缩性胃炎、胃腺癌和胃黏膜淋巴组织淋巴瘤。

3．微生物学检验

（1）检验程序。

（2）标本采集多部位采集胃、十二指肠黏膜标本，标本要新鲜，保持湿润，置2ml无菌等渗盐水中保存，在运送途中不超过3h，在4℃下最多保存5h。流行病学调查和检测治疗效果时可取血清检查。

（3）检验方法

1）显微镜检查①直接镜检：取胃、十二指肠黏膜活检标本作革兰染色，在油镜下查找细长弯曲或呈海鸥展翅状排列的菌体；由于涂片是在HP定植部位的黏膜进行观察，阳性率很高，是简便、实用、准确和较快速的诊断方法；②组织学切片：可行Warthin-Starry银染色、改良Giemsa染色、甲苯胺蓝染色、石炭酸复红染色等。

2）分离培养用含5％绵羊血的布氏琼脂或加入7％马血的心脑浸液作为非选择性培养基，用改良的Skirrow琼脂（加入万古霉素10mg/L、两性霉素B10mg/L、甲氧苄啶5mg/L）作为选择性培养基，在含5％O2、10％CO2、85％N2的微需氧环境中37℃孵育3～5天，长出细小、灰白色、半透明、不溶血的菌落。

3）快速检查①快速脲酶试验：取一小块新鲜活检标本置于含尿素的培养基中，由于幽门螺杆菌产生大量的细胞外尿素酶（相当于普通变形杆菌的20～70倍），可分解尿素产大量的氨，使培养基pH升高，指示剂变色，能在5min~30min内检测出幽门螺杆菌；这是一种简便实用、快速灵敏且较为准确的检测Hp方法，适合胃镜检查的病人；②核素标记试验：本试验的敏感性和特异性均很高，但操作起来稍繁琐；③PCR：是一种高度敏感和特异的方法，但由于实验条件要求较高，目前仅用于实验研究；④抗原检测：可用已有的商品化试剂盒，用ELISA法直接检测HP的菌体抗原。

4）鉴定 本菌的鉴定主要通过典型的菌体形态，生长缓慢，仅于37℃生长。氧化酶和触酶阳性，脲酶强阳性，对萘啶酸耐药，对头孢噻吩敏感，在1％甘油和1％胆盐中均不生长。具体生化特征见表13-2。

4．耐药性HP对多粘菌素、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺、万古霉素和萘啶酸天然耐药。在体外药敏试验中，HP对许多抗生素都很敏感，但体内用药效果并不满意，主要因为HP寄生在黏液层下的胃上皮细胞表面，抗生素不能渗入胃黏膜深层。临床上治疗HP的药物有阿莫西林、甲硝唑、克拉霉素、四环素、呋喃唑酮等。

诊断幽门杆菌两种方法学的比较

【摘要】 目的 通过14C呼吸试验和血清学试验检测幽门杆菌阳性率的差异性，以便于临床选择合适的检测方法。方法 对637例25～80岁疗养体检人员进行14C呼吸试验和血清学试验检测。结果 637例标本14C呼吸试验189例阳性，阳性率29.6%(189/637)，血清学试验179例阳性，阳性率28.1%(179/637)。两种检测方法总阳性率33.7%(215/637)。如用血清学试验漏检率5.6%(36/637)，14C呼吸试验漏检率4%(26/637)。两种检测方法经过统计学处理(χ2＝1.30，P＞0.05)。结论 14C呼吸试验和血清学试验经统计学处理差异无显著性，但血清学试验具有方便、无污染等特点。

　　【关键词】 Hp；14C呼吸试验；血清学试验

Hp感染是一个世界性问题，而我国属于感染率较高的国家，幽门杆菌在慢性胃炎和消化性溃疡等疾病中较为常见［1］。对正常健康人群进行快捷准确的方法，有利于流行病学调查和基层医院的使用。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源

　　637例25～80岁的疗养体检人员，其中男508例，女129例，全部被检者均未经过Hp治疗。

　　1.2 方法

　　1.2.1 14C呼吸试验

　　受检者在检查前禁食4～6h。受试前漱口。用120ml温水送服4++明胶胶囊1粒(由上海欣科医药有限公司提供)，内含尿素［14C］37kBq，静坐10～20min，患者深呼吸屏住2～3s，嘱受试者通过呼吸管向集气闪烁瓶吹气，吹气后在集气闪烁瓶中加入一定量闪烁液，用液体闪烁仪测定集气瓶中14C的CPM(DPM)的量，样品的放射活度与本底值的比≥3.0倍(或集气瓶中净DPM≥200)即为阳性。

　　1.2.2 血清学试验

　　每例病人采血1ml，分离血清，采用DIGFA检测病人血清中的抗Hp-IgG。试剂盒由浙江省医学科学院提供，其中抗原为Hp混合型纯化尿素酶抗原；载体是硝酸纤维素膜；检测探针为胶体金标记兔抗人IgG；按说明书操作；判断结果根据硝酸纤维素膜出现红色为阳性，仅留白色背景为阴性；质控对照采用Hp标准阳性、阴性血清［2］。

　　1.3 统计学方法 χ2检验。

　　2 结果

　　637例体检人员同时用14C呼吸试验和血清学检测，其中14C呼吸试验189例阳性，阳性率29.6%(189/637)，血清学试验179例阳性，阳性率28.1%(179/637)。两种检测方法总阳性率33.7%(215/637)。如用血清学试验漏检率5.6%(36/637)，14C呼吸试验漏检率4%，两种方法经统计学处理差异无显著性P＞0.05，χ2＝1.30，结果见表1。表1 血清学和14C呼吸试验比较（略）

　　3 讨论

　　Hp是一种G-弧形和S形弯曲菌，特异地寄生于胃黏膜黏液层下面，上皮细胞表面，它与慢性胃炎、消化性溃疡有密切关系，也是胃癌发病的危险因素［3］，通过对疗养体检者的人群检测Hp，一方面可筛查Hp阳性率在人群中的比率，另一方面也可给临床提供相关疾病的诊断依据。根据上述不同方法检测Hp，得出14C呼吸试验和血清学试验两种方法差异无显著性，14C呼吸试验因有一定的放射性，还要有特殊的仪器使其应用范围有限，而血清学方法简便、非创伤性、无污染等特点，有利于基层广泛的开展和进行血清流行病学调查。

用什么抗菌药物对它有效，而且能杀灭

幽门螺杆菌最初被分类为幽门弯曲杆菌，是革兰氏阴性、微需氧、螺旋形有动力的无芽孢杆菌。螺杆菌至少包括14个种，但只有幽门螺杆菌被确认为人类病原菌。

对人类健康的影响

幽门螺杆菌自胃中被发现，该菌与慢性胃炎有关，可进一步导致胃十二指肠溃疡和胃溃疡，但大多数感染无症状。该菌是否是这些疾病的真正病因尚不清楚。大多数幽门螺杆菌感染发生在儿童时期，未经治疗为慢性感染，感染在发展中国家更常见，与拥挤的居住环境有关。家庭间聚集现象常见。

感染源及发病

人似乎是幽门螺杆菌的主要宿主。其他宿主可能包括家猫。有证据表明幽门螺杆菌对胆盐敏感，这将减少粪便排泄的可能性，不过幼儿粪便中已分离到该菌。该菌也已在水中检出。虽然幽门螺杆菌不大可能在环境中生长，但已发现该菌在生物膜上可存活3周，在地表水中可存活20-30天。在美国进行的一项研究表明，多数地表水及浅表地下水中样品中存在幽门螺杆菌。幽门螺杆菌的存在与大肠杆菌无关。环境污染可能是通过儿童腹泻或儿童及成人呕吐物造成的。.

感染途径

家庭中人与人之间接触通过口对口传播已被确认为最可能的传染源。幽门螺杆菌可在粘膜或呕吐物中良好存活，但很难在口腔或粪便样品中检出。粪口传播也有可能。

对饮用水的意义

饮用污染的饮用水被认为是潜在的感染源，但要证实疾病的水源性传播尚需进一步深入调查。人类是幽门螺杆菌的主要感染源，该菌对氧化消毒剂敏感。可保护饮用水免受幽门螺杆菌污染的控制措施包括防止人类废物污染以及充分消毒。大肠杆菌（或耐热大肠菌）不能作为指示该菌是否存在的可靠指标。