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血清样品的前处理:甲醇高速离心?

液相色谱(LC)

  • 之前发过一篇帖子,说柱效降低,有老师说是因为血清用了甲醇提取,对柱效影响很大。
    究竟血清样品用甲醇高速冷冻离心提取,可不可行呢?
    我现在也在试其他液液萃取法,实在太麻烦了。
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  • 有水有渝

    第1楼2012/09/20

    应助达人

    可以使用固相萃取试试的。血样不管怎么提取,对柱效的损害都还是比普通分析大。

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  • dark_wzy

    第2楼2012/09/21

    其实样品前处理的选择是根据实验目的来的。如果你做的是有目标的分析,比如说血中某些特定药物成分的检测,就可以选择对于这些药物具有特异选择性的提取溶剂进行提取,不仅可以保证目标化合物的回收率,还可以减少基质和其他化合物的干扰。但是,如果做的是代谢组学等没有目标的研究,则需要选用一种通用性的前处理方法,甲醇沉淀蛋白后离心是一种非常经典的方法。至于说到该方法会导致柱效下降,其实也不尽然。之前我也一直采用这种方法,13000rpm离心15min,上清液进样,一根柱子用几千针是不成问题的。

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  • 该帖子已被版主-zhaohua8011加2积分,加2经验;加分理由:通常都是这样处理
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  • hiyvon

    第3楼2012/09/22

    我是测定血药浓度。10000rpm离心5分钟,上清液进样。1个月后。理论塔板数只有原来的一半了,峰高也明显下降了。

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  • 秋醉虞阳

    第4楼2012/09/23

    有水老师的血清固相萃取可以试下。不过如果是医院成本就会提高

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  • hiyvon

    第5楼2012/09/24

    用二氯甲烷萃取和甲醇高速离心(13000r/min,15min)做了对比。
    二氯甲烷提取法的杂质峰信号值明显降低,10+mv左右,被测物20+mv,但在较长的时间段里都有杂峰,分析时间需60分钟;
    甲醇高速离心法的杂质峰信号很强,400+mv,而被测物20+mv,但是12分钟后基本没有杂质了。
    杂质峰与被测物保留时间都分得开,但是甲醇法我怕杂质对柱子影响太大;但是二氯甲烷法时间实在太长了!

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  • zhaohua8011

    第6楼2012/09/25

    通常采用乙腈或甲醇沉淀分离蛋白

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  • gswsj

    第7楼2012/09/27

    最好在低温下离心,将转速与离心力进行换算下。

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  • hiyvon

    第8楼2012/09/27

    我试过在4℃,13000r/min,15min离心,甲醇沉淀蛋白,效果很差。

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