省部重点实验室
第1楼2012/11/27
9.1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
10.2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
碱基 | 波长(nm) | 消化系数(ε)[L/(mol·cm)] |
A | 259 | 1.54×104 |
G | 253 | 1.37×104 |
C | 271 | 9.10×103 |
T | 260 | 7.40×103 |
省部重点实验室
第2楼2012/11/27
18.1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。
19.β-巯基乙醇(BME)溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20.NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。
21.酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层,保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L)。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节 为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。
23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24.1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。
25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。
27.5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌。
省部重点实验室
第3楼2012/11/27
28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌。
29.20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0,加水定容至1L,分装后高压灭菌。
30.20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节 pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至1L,分装后高压灭菌。
31.100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。
32.1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加水定容至1L,分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1℃,pH值大约降低0.03个单位。例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/l Tris)
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱,加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水定容至1L,分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min,于室温保存。
34.X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏,并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。