注射用帕米膦酸二钠含量测定方法研究

tangtang

2012/12/31
《分析化学》

私聊

化学药检测

支持分坛团队和化学药分析版。

我公司产品注射用帕米膦酸二钠执行标准为《中国药典》2010年版二部。含量测定项下的内容为：

“【含量测定】照离子色谱法（附录 V J）测定

色谱条件与系统适用性试验用阴离子交换色谱柱；以3mmol/L草酸溶液为流动相，流速为每分钟1.2ml；检测器为电导检测器。理论板数按帕米瞵酸二钠峰计算不低于2000。”

我们在检测中发现，含量测定色谱柱的理论塔板数下降较快。经研究，将流动相由“3mmol/L草酸溶液”改变为“**溶液”，可使柱效明显稳定。方法学验证结果显示，变更后的方法准确、可靠。可用于我公司产品注射用帕米膦酸二钠含量测定。

1仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-20A高效液相色谱仪，配CDD-10A VP电导检测器。所用仪器和量具均经校准或检定。

1.2试药

对照品帕米膦酸二钠（经160℃干燥至恒重，按干燥品计含量100.2%，按100%计。）。辅料、水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱Dionex IonPac AS22阴离子交换色谱柱（4 mm ×250 mm），配保护柱（4 mm ×50 mm）；流动相**溶液；检测器为电导检测器；柱温35℃；流速1.2ml/min。进样量为20μl。理论塔板数按帕米膦酸二钠峰计算应不低于2000。

2.2溶液的制备

2.2.1空白辅料储备液：取辅料适量，按处方配成溶液备用。

2.2.2空白辅料溶液：取空白辅料储备液5ml置于50ml容量瓶中，加水定容至刻度。

2.2.3对照品溶液：精密称取帕米膦酸二钠对照品约30mg，置于50ml容量瓶中，用水溶解并定容。

2.2.4供试品溶液：精密称取帕米膦酸二钠对照品适量（根据不同验证项目，称取不同量），置于50ml容量瓶中，加水溶解后，加入5ml空白辅料储备液并用水定容。

2.3专属性试验

空白溶剂：水。

取空白溶剂、空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液，照2.1色谱条件，依法测定，记录色谱图。（附图略）

结果显示，对照品溶液和供试品溶液的色谱图中帕米膦酸二钠峰与其他峰之间分离度良好，分离度大于1.5；空白溶剂及空白辅料溶液色谱图中在帕米膦酸二钠峰处无干扰峰。本方法有良好的专属性。

2.4 线性关系及范围

精密称取帕米膦酸二钠对照品14.58、24.28、30.58、36.13、45.80 mg，分别置50ml量瓶中，用水适量溶解后，加入5ml空白辅料储备液并用水定容，摇匀，制成每1ml中含帕米膦酸二钠0.2916、0.4856、0.6116、0.7226、0.9160mg的系列溶液。照2.1色谱条件，各精密量取上述系列溶液20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以帕米膦酸二钠峰面积为纵坐标，帕米膦酸二钠浓度（mg/ml）为横坐标，作图，进行线性回归。

测定结果如下（附图略）：

表注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证：线性关系试验结果

序号	1	2	3	4	5
浓度（mg/ml）	0.2916	0.4856	0.6116	0.7226	0.9160
峰面积	706336	1167035	1475202	1755366	2237689
校正因子	2.06417E-05	2.08049E-05	2.07294E-05	2.05826E-05	2.04675E-05
线性关系回归方程为：Y=2455988X-18726
相关系数r=0.9999，n=5
截距＜100%浓度响应值的2%
校正因子RSD=0.6%

曲线图：

在0.2916～0.9160mg/ml的浓度范围内（相当于注射用帕米膦酸二钠标示量的50%~150%），帕米膦酸二钠峰面积与浓度（mg/ml）之间呈良好的线性关系。

2.5进样精密度试验

取对照品溶液，连续测定6次，计算6次峰面积的RSD。

测定次数	1	2	3	4	5	6
峰面积A	1528751	1515391	1515906	1496740	1505302	1509383
结果	平均峰面积A=1511912 RSD=0.72%。

结果显示进样精密度良好。

2.6回收率试验

精密称取帕米膦酸二钠对照品约24、30、36mg各3份（详细称样量见下表），分别置50ml量瓶中，用水适量溶解后，加入5ml空白辅料储备液并用水定容，摇匀，制成每1ml中含帕米膦酸二钠0.48、0.60、0.72mg的系列溶液（即相当于标示量80%、100%和120%的3个浓度的溶液），每份溶液测定2次。计算每份样品溶液的回收率、各浓度回收平均值及总回收率均值，公式如下：

回收率=实测量÷加入量×100%

测定结果如下（附图略）：

表注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证：回收率试验结果-1

加入量（mg）	实测量（mg）	回收率	平均值	RSD	总平均值	总RSD
24.28	24.10	99.24%	99.07%	0.18%	99.77%	0.81%
24.28	24.10	99.27%
24.37	24.13	99.00%
24.37	24.16	99.12%
24.12	23.83	98.80%
24.12	23.87	98.98%
30.58	30.75	100.56%	100.06%	0.82%
30.58	31.04	101.52%
30.21	30.01	99.35%
30.21	30.12	99.69%
30.20	30.07	99.57%
30.20	30.11	99.69%
36.13	36.32	100.52%	100.16%	0.79%
36.13	36.56	101.18%
36.05	36.15	100.27%
36.05	36.25	100.54%
35.10	34.91	99.45%
35.10	34.76	99.02%

结果显示准确度良好。

2.7重复性试验

从2.6的回收率试验可以看出，本法重复性良好。

2.8中间精密度

由另一检验员，在另一天重新进行回收率试验，同时也是重复性试验，结果如下：

表注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证：回收率试验结果-2

加入量（mg）	实测量（mg）	回收率	平均值	RSD	总平均值	总RSD
24.31	24.18	99.46%	99.30%	0.41%	99.80%	0.51%
24.31	24.18	99.23%
24.01	23.67	98.58%
24.01	23.81	99.18%
24.16	24.08	99.67%
24.16	24.08	99.67%
30.52	30.61	100.30%	100.03%	0.44%
30.52	30.69	100.57%
30.15	30.14	99.96%
30.15	30.05	99.66%
30.25	30.34	100.31%
30.25	30.07	99.41%
36.22	36.34	100.32%	100.07%	0.25%
36.22	36.28	100.16%
36.15	36.17	100.06%
36.15	36.23	100.23%
36.53	36.55	100.05%
36.53	36.39	99.61%

结果显示中间精密度良好。

2.9溶液稳定性

取对照品溶液及供试品溶液，分别在室温放置约0、2、4、6、8、10小时，依法测定。

测定结果如下（附图略）：

表注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证：对照品溶液稳定性考察结果

测定时间	0h		2h	4h	6h	8h	10h
峰面积A	1515486		1506762	1498116	1496981	1497095	1499961
与0小时偏差	/		0.58%	1.15%	1.22%	1.21%	1.02%
结果		平均峰面积A=1502400 RSD=0.49%，偏差均小于2.0%。

表注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证：供试品溶液稳定性考察结果

测定时间	0h		2h	4h	6h	8h	10h
峰面积A	1585143		1583315	1584608	1597966	1597860	1601466
与0小时偏差	/		0.12%	0.03%	0.81%	0.80%	1.03%
结果		平均峰面积A=1591726 RSD=0.52%，偏差均小于2.0%。

上述结果显示，本方法对照品溶液及供试品溶液在配制完成后室温放置10小时内稳定。

3结论

我公司注射用帕米膦酸二钠含量测定流动相变更的分析方法进行了研究。结果表明变更后的方法专属性、线性关系及范围、准确度、精密度和溶液稳定性均良好，符合规定；变更后的分析方法适用于我公司产品注射用帕米膦酸二钠的含量测定，检验数据准确可靠。