yzulcl
第9楼2013/01/27
不考虑高浓度有可能导致的色谱柱过载,从而导致的色谱保留行为异常。仅仅考虑 DAD 检测器对一个理想的色谱峰的响应来说,浓度过高会导致至少两个问题:
1、吸光度超出 DAD 的线性响应范围(检测器在部分波长的信号饱和),导致吸收光谱图变形失真,于是计算出的峰纯度降低;
2、高浓度导致朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律不适用,光谱图失真,计算出的峰纯度不对。
大家经常可以看到的平头峰,基本就是检测器饱和的体现。
经常可以发现的现象是:某物质在最大吸收波长(比如 254 +/- 4 nm)是平头峰,但是同样的浓度在非最大吸收波长(比如 280 +/- 4 nm)就不是平头峰。
这时候计算峰纯度一定不会高,适当降低上样量,保证任何波长都不平头,再计算峰纯度就会比较好。
yzulcl
第10楼2013/01/27
主峰里面如果有未完全分离的杂质:
——如果杂质的光谱图与主成分的光谱图一模一样;那么峰纯度是看不出来有没有杂质的,要看色谱峰形有没有异常才能确认,所以首先排除色谱分离等因素导致的峰形异常是前提。
——如果杂质的光谱图与主成分的光谱图不一样;但是杂质与主成分的保留时间完全相同、峰宽也完全相同;那么峰纯度也看不出来杂质的存在。
——如果杂质的光谱图与主成分的光谱图不一样;保留时间略有偏差,或者虽然保留时间相同但是峰宽不同;这个时候就是峰纯度的用武之地了。