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样品浓度、空间构型对峰纯度有影响吗

  • goldendays
    2013/01/22
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 最近在检测一个物质的时候发现,较低浓度下(如10mg/ML)和较高浓度下(15mg/ml),峰纯度有很大的差异,前者峰纯度在0.99以上。后者就只有0.80以下了。继续提高浓度,峰纯度甚至低到0.60. 我一开始认为因为低浓度下杂质不显著,所以峰纯度很高。后来发现继续提高浓度峰纯度一直在下降,没有趋于稳定的情况。这似乎不像是杂质响应低的情况。

    因为样品中带有五元环的结构,同一样品中会有不同的构型存在。有没有可能是因为空间构型的原因导致峰纯度的降低?

    恳请大家能指教。
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  • vip_pis

    第1楼2013/01/22

    理论上是没有影响的,是不是仪器不稳定造成的呢

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  • 北方海盗

    第2楼2013/01/24

    色谱柱的通量(也可以说容量)是有限的。浓度过高了,不会成线性关系。欢迎致电大连依利特公司。

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  • goldendays

    第3楼2013/01/25

    谢谢。那是否可以理解为样品中是有杂质存在,浓度提高,杂质的响应也得到提高,但因为没有成线性关系,所以峰纯度显示值就很怪异?

    北方海盗(herozxq) 发表:色谱柱的通量(也可以说容量)是有限的。浓度过高了,不会成线性关系。欢迎致电大连依利特公司。

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  • 三人行

    第4楼2013/01/25

    峰过载时无法准确测定峰纯度。

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  • mslab12

    第5楼2013/01/25

    据我所知 浓度不能太高 好像DAD 最高峰 不能超过1。

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  • xiaowang268

    第6楼2013/01/25

    为什么呢?

    mslab12(mslab12) 发表:据我所知 浓度不能太高 好像DAD 最高峰 不能超过1。

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  • xiaowang268

    第7楼2013/01/25

    浓度应该不影响吧,前提是不能超载

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  • houjjun

    第8楼2013/01/26

    当然有影响,浓度大峰会分叉或平顶

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  • yzulcl

    第9楼2013/01/27

    应助达人

    不考虑高浓度有可能导致的色谱柱过载,从而导致的色谱保留行为异常。仅仅考虑 DAD 检测器对一个理想的色谱峰的响应来说,浓度过高会导致至少两个问题:

    1、吸光度超出 DAD 的线性响应范围(检测器在部分波长的信号饱和),导致吸收光谱图变形失真,于是计算出的峰纯度降低;
    2、高浓度导致朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律不适用,光谱图失真,计算出的峰纯度不对。

    大家经常可以看到的平头峰,基本就是检测器饱和的体现。
    经常可以发现的现象是:某物质在最大吸收波长(比如 254 +/- 4 nm)是平头峰,但是同样的浓度在非最大吸收波长(比如 280 +/- 4 nm)就不是平头峰。
    这时候计算峰纯度一定不会高,适当降低上样量,保证任何波长都不平头,再计算峰纯度就会比较好。

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  • yzulcl

    第10楼2013/01/27

    应助达人

    主峰里面如果有未完全分离的杂质:

    ——如果杂质的光谱图与主成分的光谱图一模一样;那么峰纯度是看不出来有没有杂质的,要看色谱峰形有没有异常才能确认,所以首先排除色谱分离等因素导致的峰形异常是前提。

    ——如果杂质的光谱图与主成分的光谱图不一样;但是杂质与主成分的保留时间完全相同、峰宽也完全相同;那么峰纯度也看不出来杂质的存在。

    ——如果杂质的光谱图与主成分的光谱图不一样;保留时间略有偏差,或者虽然保留时间相同但是峰宽不同;这个时候就是峰纯度的用武之地了。

    goldendays(goldendays) 发表:谢谢。那是否可以理解为样品中是有杂质存在,浓度提高,杂质的响应也得到提高,但因为没有成线性关系,所以峰纯度显示值就很怪异?

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