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岛津新仪器空白很高,求助

  • hebaihudie
    2013/06/13
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 新进岛津LC-2010A HT,原装进口仪器。

    调试好后走空白,波长分别为214nm 和254 nm。

    柱子为 InertSustain C18 5um,4.6*150mm,

    流动相为 屈臣氏纯净水和 色谱纯乙腈。

    梯度为:

    时间(min A% B

    0.00 95 5

    10 0 100

    10.5 95 5

    15 95 5

    空白图中,波长214nm 下,基线向上飘移,最主要的是会出几个峰,高度最大的达到了30mv。 这么高的空白,导致测样时,分辨不出哪个是样品杂质峰,哪个是空白峰。样品图扣除空白后,经常扣不干净,或者出现倒峰。(附图如下)

    工程师说这是正常的,因为我的氘灯在214nm 下能量太高了。

    我看了下能量如下:214 nm , 样品池 2378mv, 参比池 2071 mv.

    254 nm , 样品池 1568mv, 参比池 1297 mv.

    我觉得氘灯是新的,刚用没有几个小时,这么高的能量不是正常的吗?

    主要疑惑在于:工程师说是因为氘灯在214nm处能量太高,所以才会有这么大的背景峰。不知这个说法可信否?

    求指点。
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  • 三人行

    第1楼2013/06/13

    梯度程序不合理。

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  • doczheng

    第2楼2013/06/13

    一楼一语道破
    十分钟内的乙腈比例从5%到100%,短时间乙腈比例上身如此之快,出的峰估计全是梯度峰,这种梯度峰重现性也不好的

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  • hebaihudie

    第3楼2013/06/13

    我知道,10min-10.5 min分钟的时候,梯度变化太快,导致12min出了一个很大的溶剂峰。除去这个地方,前面的梯度也不合理吗?

    因为是总公司定的梯度,我照搬过来的。

    三人行(jncxyy2012) 发表:梯度程序不合理。

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  • 三人行

    第4楼2013/06/13

    0min-10min也变化过快,这样变法没有必要用梯度,可以用等度洗脱。

    hebaihudie(hebaihudie) 发表:我知道,10min-10.5 min分钟的时候,梯度变化太快,导致12min出了一个很大的溶剂峰。除去这个地方,前面的梯度也不合理吗?

    因为是总公司定的梯度,我照搬过来的。

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  • hebaihudie

    第5楼2013/06/13

    谢谢谢谢。那个,以你看,比较好的梯度方法是什么那。我们因为要大量做样,所以就定了一个最大梯度范围的方法,好尽可能使大部分样品都有比较好的保留时间。请不吝赐教。

    doczheng(doczheng) 发表:一楼一语道破

    十分钟内的乙腈比例从5%到100%,短时间乙腈比例上身如此之快,出的峰估计全是梯度峰,这种梯度峰重现性也不好的

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  • hebaihudie

    第6楼2013/06/13

    因为要走的样品比较多,想用这个大梯度的方法,使大部分样品都能有比较好的保留。这个梯度太大了吗?

    三人行(jncxyy2012) 发表:0min-10min也变化过快,这样变法没有必要用梯度,可以用等度洗脱。

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  • 三人行

    第9楼2013/06/13

    是要跑的样品组分较多吗?

    hebaihudie(hebaihudie) 发表:因为要走的样品比较多,想用这个大梯度的方法,使大部分样品都能有比较好的保留。这个梯度太大了吗?

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  • hebaihudie

    第10楼2013/06/13

    不是,是样品个数很多,而且每个样品都不一样,有点像高通量分析。

    三人行(jncxyy2012) 发表:是要跑的样品组分较多吗?

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  • 三人行

    第11楼2013/06/13

    流动相没有万能的,只是选择相对合理的。最好跑样品调试一下。

    hebaihudie(hebaihudie) 发表:不是,是样品个数很多,而且每个样品都不一样,有点像高通量分析。

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  • doczheng

    第12楼2013/06/13

    大量做样?和梯度无关吧,一般梯度是用来分析成分复杂,恒流无法达到满意的分类效果,都不知道你分离的样品含有哪些成分,个人建议你设置三个梯度,低中高,起始5%到10%,维持一段时间,然后上升至50左右吧,最后来个高浓度的有机,具体调整得根据实际情况

    hebaihudie(hebaihudie) 发表:谢谢谢谢。那个,以你看,比较好的梯度方法是什么那。我们因为要大量做样,所以就定了一个最大梯度范围的方法,好尽可能使大部分样品都有比较好的保留时间。请不吝赐教。

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